[发明专利]利用环化RNase H检测基因多态性SNP位点的方法

摘要

一种分子生物技术领域的利用环化RNase H检测基因多态性SNP位点的方法，利用转肽酶Sortase A将线性的RNase H环化、具有茎环结构的探针、待测DNA片段、待测DNA特异性的正向引物与反向引物、Vent DNA聚合酶、环化的APERNase HII，测定待测DNA片段特定位点的SNP，提高了RNase H的热稳定性。

主权项

一种利用环化RNase H检测基因多态性SNP位点的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、纯化N端含有寡聚甘氨酸、C端含有转肽酶Sortase A识别序列的线性APE RNaseHII；步骤二、环化N端含有寡聚甘氨酸、C端含有识别序列的线性APE RNase HII：转肽酶Sortase A与线性的APE RNase HII在标准反应缓冲液并温浴24h；步骤三、鉴定环化RNase H的热稳定性，环化的RNase H与未环化的RNase H经不同的温度加热处理后，鉴定其酶学活性；步骤四、合成具有茎环结构的两端含有荧光基团及淬灭基团的探针，探针5’末端及3’末端为互补序列，剩余的探针序列与待测单链DNA的SNP位点两侧核苷酸配对；步骤五、设计合成用于扩增目的DNA的特异性正向引物和反向引物，PCR扩增目的DNA；步骤六、利用合成的探针及环化的RNase H，在Steponeplus仪上进行PCR反应，测定待测单链DNA待测位点的单核苷酸多态性。