[发明专利]piggyBac转座子介导生产体内合成半胱氨酸转基因山羊的载体构建方法及其应用

摘要

本发明公开了一种能用于生产转基因羊的piggyBac转座子载体的构建方法，主要步骤包括：①合成一段包含piggyBac转座子发生转座所必需的PB5′端和PB3′端碱基序列，合成时在PB5′端和PB3′端中间预留出多克隆位点，然后将该序列克隆到pBluSKm载体中构建成pBluSKm-PB载体；再将Neomycin抗性基因和绿色荧光蛋白基因克隆到pBluSKm-PB载体中最终构建成pBluSKm-PB-NEO-EGFP转座子载体。本发明所获得的转座子载体能够满足细胞筛选、倒置荧光显微镜下显微操作和生产转基因羊等要求。

主权项

一种生产转基因羊的piggyBac转座子载体的构建方法，其特征在于包括如下步骤：合成一段PB碱基序列，将该序列克隆到pBluSKm载体中构建成pBluSKm‑PB载体；再将Neomycin抗性基因和绿色荧光蛋白基因克隆到pBluSKm‑PB载体中，最终构建成pBluSKm‑PB‑NEO‑EGFP转座子载体，所述的PB碱基序列为：CCCCCCGGTACCCCCTAGAAAGATAGTCTGCGTAAAATTGACGCATGCATTCTTGAAATATTGCTCTCTCTTTCTAAATAGCGCGAATCCGTCGCTGTGCATTTAGGACATCTCAGTCGCCGCTTGGAGCTCCCGTGAGGCGTGCTTGTCAATGCGGTAAGTGTCACTGATTTTGAACTATAACGACCGCGTGAGTCAAAATGACGCATGATTATCTTTTACGTGACTTTTAAGATTTAACTCATACGATAATTATATTGTTATTTCATGTTCTACTTACGTGATAACTTATTATATATATATTTTCTTGTTATAGATATCGTCGACCCCCCCCATCGATCCCCCCCCCACGCGTTAAAAGTTTTGTTACTTTATAGAAGAAATTTTGAGTTTTTGTTTTTTTTTAATAAATAAATAAACATAAATAAATTGTTTGTTGAATTTATTATTAGTATGTAAGTGTAAATATAATAAAACTTAATATCTATTCAAATTAATAAATAAACCTCGATATACAGACCGATAAAACACATGCGTCAATTTTACGCATGATTATCTTTAACGTACGTCACAATATGATTATCTTTCTAGGGCCGCGGCCCCCCC。