[发明专利]一种水生鸢尾体细胞再生的组培方法

摘要

本发明公开了一种水生鸢尾体细胞再生的组培方法，属于植物组织培养技术领域。方法包括：(1)培养基的配制；(2)水生鸢尾脱毒组培苗的培养：(3)组培苗的移栽与培养等步骤。本发明以无菌苗叶片作为胚状体诱导外植体所建立的组培快繁技术体系，具有繁殖系数大、速度快、结构完整、再生率高及生产成本低等特点，与一般器官组培方法相比较，在整个组培周期上缩短了75天，瓶苗增殖系数增加了2.4倍，组培苗生根率和移栽成活率达均100％，适合工厂化育苗，可商品化生产。本方法可在水生鸢尾种苗的企业化生产中推广应用。

主权项

一种水生鸢尾体细胞再生的组培方法，其特征在于按如下步骤进行：(1)培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的组分与各组分每升所含重量为：1)基本培养基：水生鸢尾芽诱导采用MS培养基，叶片胚状体诱导和增殖、壮苗及生根均采用WPM培养基；其中，白糖15～60g/L，琼脂5～8g/L，pH5.6～5.8；2)芽诱导培养基：MS+6‑BA0.5～1.0mg/L和NAA0.2～0.5mg/L；3)叶片胚状体诱导培养基：WPM+ZT 0.0～1.0mg/L、TDZ 0.25～0.3mg/L和2，4‑D 0.0～0.1mg/L；4)继代增殖培养基：WPM+ZT 0.5～1.0mg/L、TDZ 0.25～0.3mg/L和2，4‑D0.05～0.1mg/L；5)壮苗培养基：WPM+BA0.3～1.0mg/L和NAA0.1～0.3mg/L；6)生根培养基：WPM+IBA0.5～1.5mg/L+NAA0.5～1.5mg/L；(2)水生鸢尾脱毒组培苗的培养：1)外植体的采取与灭菌：取健壮水生鸢尾植株剪除基部以上叶片及根系后的幼嫩芽，经10％洗洁精浸泡8～10min、流水冲洗3～4h后，于超净工作台上用无菌水冲洗干净；用70％酒精浸泡30～60s，再用0.1％升汞水溶液浸泡8～10min进行灭菌后用无菌水冲洗5～6次；将其茎尖组织块拨出、切成0.2～0.5cm3小块作为外植体，备用；2)芽诱导培养：将上述茎尖外植体接种到步骤(1)2)芽诱导培养基上，在温度25±2℃，光强1500～2500Lx，光照时间12h/d条件下进行芽诱导培养10～20天至诱导形成丛生芽；3)叶片胚状体诱导培养：将上述丛生芽上的叶片切下并接种到步骤(1)3)叶片胚状体诱导培养基上，在温度25±2℃，光强1500～2500Lx，光照时间12h/d条件下进行胚状体诱导培养15～30天至诱导形成胚状体或芽；4)继代增殖培养：将上述胚状体或芽转接到步骤(1)4)继代增殖培养基上，在培养温度25±2℃，光强1500～2500Lx，光照时间12h/d条件下进行增殖培养10～15天至形成丛生芽；根据对丛生芽数量的需求，每隔10～20天按同样方法将所形成的丛生芽进行一次再增殖；5)壮苗培养：将上述丛生芽转接到步骤(1)5)壮苗培养基上，在培养温度25±2℃，光强1500～2500Lx，光照时间12h/d条件下进行壮苗培养20～30天至苗高6～8cm；6)生根培养：将上述6～8cm高的壮苗转接到步骤(1)6)生根培养基中，在培养温度25±2℃，光强1500～2500Lx，光照时间12h/d条件下进行生根培养15～30天，至基部长出1～5根根系即成水生鸢尾脱毒组培苗；(3)组培苗的移栽与培养：将长高至10～15cm、长根≥5根的组培苗，移栽至由沙壤土∶泥炭∶黄壤土按体积6∶3∶1的混合基质中，在温度25～28℃，湿度70～85％，光照宜先弱后强并控制在10000lx以下条件下培养1～2个月后，即成水生鸢尾生产苗。