[发明专利]猪气管上皮细胞系及其建立方法无效
| 申请号： | 201110050762.9 | 申请日： | 2011-03-03 |
| 公开（公告）号： | CN102174573A | 公开（公告）日： | 2011-09-07 |
| 发明（设计）人： | 张彦明 | 申请（专利权）人： | 张彦明;陈宝玉 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10;C12R1/91 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 712100 陕西省西安市杨凌*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种猪气管上皮细胞系的建立方法，包括以下步骤：(1)原代培养：无菌获取初生仔猪气管，清除粘附组织，采用链酶蛋白酶灌注冷消化法消化分离获得高纯度的气管上皮细胞；将分离得到的原代气管上皮细胞悬浮于DF12培养基中，置于37℃，5％CO2条件下培养；(2)转染和筛选：提取纯化含有hTERT基因的真核表达质粒pCI-neo-hTERT，采用脂质体转染法，将编码hTERT和neo基因的真核表达质粒pCI-neo-hTERT导入步骤(1)原代培养的猪气管上皮细胞进行转染；(3)筛选和扩大培养。本发明方法易于培养，生长速度较快，操作方法简便。 | ||
| 搜索关键词： | 气管 上皮 细胞系 及其 建立 方法 | ||
【主权项】：
一种猪气管上皮细胞系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)原代培养：无菌获取初生仔猪气管，清除粘附组织，采用链酶蛋白酶灌注冷消化法消化分离获得高纯度的气管上皮细胞；将分离得到的原代气管上皮细胞悬浮于DF12培养基中，置于37℃，5％CO2条件下培养；(2)转染和筛选：提取纯化含有hTERT基因的真核表达质粒pCI‑neo‑hTERT，采用脂质体转染法，将编码hTERT和neo基因的真核表达质粒pCI‑neo‑hTERT导入步骤(1)原代培养的猪气管上皮细胞进行转染；(3)筛选和扩大培养。
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