[发明专利]一种测定SDS敏感蛋白酶活力的酶谱方法

摘要

一种测定SDS敏感蛋白酶活力的酶谱方法，包括凝胶配制步骤和电泳步骤，电泳用聚丙烯酰胺凝胶由两种不同组分配比的聚丙烯酰胺凝胶组成。与Neutral-PAGE酶谱法相比，本方法不但能够很好的检测SDS敏感蛋白酶的活性，且能确定蛋白酶的分子量大小，并克服普通酶谱方法酶活条带易呈点状扩散，形成重叠的缺陷，提高酶谱的分辨率。

主权项

一种测定SDS敏感蛋白酶活力的酶谱方法，包括凝胶配制步骤和电泳步骤，其特征在于电泳用聚丙烯酰胺凝胶由两种不同组分配比的聚丙烯酰胺凝胶组成：a. 聚丙烯酰胺凝胶I由3质量份丙烯酰胺混合溶液I和1质量份浓缩胶缓冲液组成，其中：（1）丙烯酰胺混合溶液I由丙烯酰胺、过硫酸铵、N,N,N′,N′‑四甲基二乙胺（TEMED）和超纯水组成，该溶液中丙烯酰胺质量体积比为6.67%、过硫酸铵质量体积比0.133%、N,N,N′,N′‑四甲基二乙胺（TEMED）质量体积比0.133%，pH 6.8;（2）浓缩胶缓冲液为 0.5 mol/L Tris‑HCL溶液，pH 6.8;b. 聚丙烯酰胺凝胶II由3质量份丙烯酰胺混合溶液II和1质量份分离胶缓冲液组成，其中：（1）丙烯酰胺混合溶液II由丙烯酰胺、明胶、过硫酸铵、N,N,N′,N′‑四甲基二乙胺（TEMED）和超纯水组成，该溶液中丙烯酰胺质量体积比为13.33%、过硫酸铵质量体积比0.133%、N,N,N′,N′‑四甲基二乙胺（TEMED）质量体积比0.133%、明胶质量体积比0.133%，pH 8.8;（2）分离胶缓冲液为 1.5 mol/L Tris‑HCL溶液，pH 8.8;c. 上述两种聚丙烯酰胺凝胶分别配制完成后，按照体积比聚丙烯酰胺凝胶I：聚丙烯酰胺凝胶II=2:5，用于制备电泳用聚丙烯酰胺凝胶。