[发明专利]一种用油厂土壤中筛选的菌株固态发酵生产脂肪酶的方法

摘要

一种用大庆日月星油厂附近土壤中筛选的菌株固态发酵生产脂肪酶的方法，本发明涉及采用筛选分离的方法从土壤中提取产脂肪酶的菌株，并对其采用固态发酵的方法生产脂肪酶。将分离纯化后的该菌接入到固态发酵培养基中，在此过程中确定产脂肪酶获利最高的发酵参数：在种龄36h，接种量0.3％的脂肪酶固态发酵条件下，麸皮和豆粕的比为1∶4，含水量为50％(V/W)，发酵温度29℃，发酵时间3d。此时，固态培养基中脂肪酶的活力可达1450U/g。

主权项

一种在大庆日月星油厂附近土壤里提取出的菌株固态发酵产脂肪酶的方法，其特征在于用大庆日月星油厂附近土壤筛选得到的菌株固态发酵的方法产脂肪酶，其最佳发酵参数的确定通过以下步骤实现：一、将从大庆油厂附近的土壤，取2g土样与9ml无菌水混合，加玻璃珠振荡摇匀后静置片刻，取5ml上清液加入到富集培养基中，28℃～31℃，160r/min～190r/min振荡培养2d～5d。取10ml培养液加到另一新鲜富集培养基中继续振荡培养，重复此操作两次后，涂布在含有溴甲酚紫的固态脂肪酶筛选平板上。29℃倒置培养4d～5d，可观察到菌落周围形成黄色变色圈，表明该菌株可产脂肪酶。并筛选生长状况良好的菌株5株；二、将初筛到的5株菌株纯化后的斜面菌株接种至脂肪酶液体种子培养基培养3d，按0.3％的接种量将液体菌种接入液体产酶培养基中，将三角瓶置于28℃～31℃培养箱中振荡培养，结果测得发酵液中xjA的脂肪酶活力最高，为3.1U/ml；将xjA转接到发酵培养基中发酵培养2d～5d，再将菌株以同样的接种量(0.3％)转接到固态发酵产酶培养基中，发酵培养。当种龄为36h时脂肪酶活力最高为1450U/g，确定产酶量最高的菌株为xjA；三、把筛选得到产酶量最高的菌株xjA进行固态发酵培养，在种龄为36h，以0.3％接种量，在碳源和氮源为麸皮和豆粕的培养基上，分别考查了当碳氮比为0∶5，1∶4，2∶3，3∶2，4∶1，5∶0，培养基含水量为1∶0.5，1∶1，1∶1.5，1∶2，1∶2.5(培养基∶水)，发酵温度为25℃～33℃，发酵时间为1d～8d时发酵产脂肪酶的活力，确定了产脂肪酶的最佳固态发酵条件；四、在最佳碳氮比、培养基含水量、发酵温度和发酵时间的条件下接入xjA菌株，固体发酵产脂肪酶，对此时生产出的脂肪酶检测其活力，并测定此时发酵产出的脂肪酶活力为1450U/g。