[发明专利]一种可用于表达miR-122载体pSU6-miR-122的构建方法及用途无效
| 申请号： | 201110091757.2 | 申请日： | 2011-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN102212555A | 公开（公告）日： | 2011-10-12 |
| 发明（设计）人： | 吴建国;邬开朗;陈燕妮;朱应 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A61K48/00;A61P31/20 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 430072*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种可用于表达miR-122载体pSU6-miR-122的构建方法及用途，其步骤是：a、化学合成寡核苷酸链，反义链与有义链互补，在5’端添加上AGCT以产生粘性突出末端；b、有义链、反义链退火,形成带BamHI和HindIII粘性末端的片段；c、将片段连接至载体pSilencer-2.1-U6，载体由BamHI和HindIII双酶切；d、转化大肠杆菌Stbl3感受态细胞；e、筛选阳性克隆，得到表达miR-122的载体pSU6-miR-122质粒。该载体在抑制乙肝病毒的药物中的用途，抗乙肝病毒感染效率高，特异性强，对正常细胞无毒性，对乙肝病毒复制的抑制率为85.2%。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 表达 mir 122 载体 psu6 构建 方法 用途 | ||
【主权项】：
一种可用于表达miR‑122载体pSU6‑miR‑122的构建方法，其步骤是： a、化学合成寡核苷酸链，有义链：5’‑GGATCCAGCTGTGGAGTGTCGAAATGGTGTTTGTGTCCAAACTATCAAACGCCATTTCAACACTAAATAGCTTTTTTGGAAA‑3’反义链：5‘‑AGCTTTCCAAAAAAGCTATTTAGTGTTGAAATGGCGTTTGATAGTTTGGACACAAACACCATTTCGACACTCCACAGCTGG与有义链互补，且在5’端添加上AGCT以产生粘性突出末端；b、 有义链、反义链退火,形成带BamHI和HindIII粘性末端的片段；c、 将（b）步骤的片段连接至载体pSilencer‑2.1‑U6，载体由BamHI和HindIII双酶切；d、 转化大肠杆菌Stbl3感受态细胞；e、 筛选阳性克隆，并测序鉴定，得到表达miR‑122的载体pSU6‑miR‑122质粒。
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