[发明专利]两种大豆病菌的PCR检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明是一种PCR检测大豆南方茎溃疡病菌（DPM）和大豆北方茎溃疡病菌（DPC）试剂盒及检测方法。该试剂盒及检测方法是根据DPM、DPC两种植物病原真菌ITS区域序列分别设计合成了一对特异性引物，应用PCR技术对提取的DNA进行扩增，分别扩增出270bp和339bp的PCR片段，研制了阳性质控对照，可对两种真菌进行定性检测，简便快速，特异性好，灵敏度高，可用于进出境大豆携带DPM、DPC的检测和国内外大豆种植区的DPM、DPC疫情监测，及时对发生的疫情进行防治，具有很大的推广价值和实用价值。

主权项

一种大豆南方茎溃疡病菌和大豆北方茎溃疡病菌PCR检测试剂盒，其特征在于，它由下列物品构成：1)、阴性对照，成份为1mL灭菌双蒸水                     1支 ；      2)、阳性对照，试剂成份为溶于1mL 灭菌双蒸水中100ng 的DPM菌株DNA  1支 ；  3)、阳性对照，试剂成份为溶于1mL 灭菌双蒸水中100ng 的DPC菌株DNA 1支 ；4)、dNTP                                               1支  ；5)、不含Mg2+的PCR缓冲液                                1支； 6)、含Mg2+的缓冲液                                       1支 ； 7)、引物对DPMF3/DPMR2                           DPMF3为: 5’‑CCGAAACTCTGAGCAAAAAACAC‑3’       1支；DPMR2为: 5’‑CCTGGCGAGCCCGCCACTAG‑3’           1支；8)、引物对DPCF4/ DPCR2   DPCF4为:5’‑GCCCCCTTGGGGGCCCCCC‑3’         1支；    DPCR2 为: 5’‑TCCTGGCGAGCTCGCCAATGA‑3’     1支 ；9)、DNA聚合酶                                     1支；10)、灭菌双蒸水                                 1支；11)、包装盒子，一块泡沫板，其大小与包装盒子的底面相同，装于盒子中；泡沫板上有不少于上述小管数量的小孔，上述各小管分别对应放置于这些小孔中； 将阳性对照单独存放；试剂盒于‑20℃保存。