[发明专利]一种同时检测动物组织中多种激素类兽药残留量的检测方法

摘要

本发明涉及分析化学、食品安全领域。一种同时检测动物组织中多种激素类兽药残留量的检测方法，样品经乙腈提取，再经C18柱、硅胶柱和氨基柱三个SPE柱净化，微波辅助衍生反应后，采用DB-5MS毛细管柱（0.25mm×30m×0.25μm）分离与检测九种激素类兽药残留量。本发明九种激素类兽药己烷雌酚、己烯雌酚、己二烯雌酚、还原尿睾酮、表睾酮、雌酮、雌二醇、炔雌醇、雌三醇的检出限分别为：0.1μg/kg;0.3μg/kg;0.15μg/kg;1μg/kg;0.17μg/kg;0.3μg/kg;0.4μg/kg;0.35μg/kg;0.3μg/kg。本发明方法的检测低限满足国内外相关法规的要求，精密度、回收率等技术指标符合相关标准的规定。

主权项

一种同时检测动物组织中多种激素类兽药残留量的检测方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：（1）样品提取：称取5g动物组织（猪肉、猪肝、猪肾）样品于50ml塑料离心管中，加入25ml提取剂，匀质，以4000 r/min离心3min,上清液移入125ml分液漏斗中，在剩下的残留样中再加入15ml提取剂，超声提取5min，离心后上清液移入上述125ml分液漏斗中；（2）提取液脱脂：向分液漏斗提取液中加入25 mL脱脂溶剂，震荡1分钟，静置分层后，将下层层放入另一125ml分液漏斗中，向下层再加入25 mL脱脂溶剂萃取一次，静置分层后将下层转移到100 ml鸡心瓶中，40℃水浴下用氮吹仪吹干，用0.2mL甲醇溶解；（3）C18小柱净化：将以上提取液移入经过预淋洗的C18小柱, 控制流量为3 ml/min,弃去流出液,用1 ml水淋冼鸡心瓶2次,并将淋冼液移入C18小柱过柱,弃去流出液，依次用3 ml水, 3 ml甲醇‑水溶液淋洗C18小柱,待最后一次淋洗液完全流出C18小柱后,离心抽干小柱，至少抽干3分钟，最后用6 ml甲醇（两次个3 ml）将C18小柱中的激素冼脱，收集洗脱液于50 ml鸡心瓶，在40℃水浴下用氮吹仪吹干，用3 mL正己烷‑二氯甲烷溶液溶解，待过硅胶柱；（4）硅胶柱净化：将上述经C18小柱净化的样液过硅胶柱，用3mL淋洗液淋洗，最后用15mL洗脱液洗脱，收集洗脱液于50 ml鸡心瓶，在40℃水浴下用氮吹仪吹干，用2mL乙酸乙酯‑甲醇溶液溶解，待过氨基柱；（5）氨基拄净化：将上述经硅胶柱净化的样液过氨基拄，用6mL乙酸乙酯‑甲醇溶液洗脱，收集上样液和洗脱液于50 ml鸡心瓶，在40℃水浴下用氮吹仪吹干,待衍生；（6）衍生反应：蒸干的残渣中，加入衍生剂，盖紧螺盖，迅速涡旋1min,放入微波炉中，700 W输出功率下，衍生30s，从微波炉里取出后冷却至室温，用正己烷定容至0.5 mL，过0.22 µm 微孔滤膜，48h内进行GC/MS测定；（7）气相色谱‑质谱仪测定①定性测定：按照气相色谱/质谱条件分别测定样品溶液和标准溶液，如果样品的GC‑MS数据符合下列限定，则可定性判定为某种激素残留：A、样品中待测物质与标准品具有相同的保留时间，偏差在±2.5%以内；B、监测离子的信噪比应≥3；C、扣除本底后该峰的质谱图存在所有选定的监测离子；D、样品中待测物的全部监测离子的相对强度应与标准溶液中相应化合物的的离子相对强度比值一致，偏差在±20%以内；②定量测定：以各激素的监测离子中信号响应最高且无干扰的单离子对为定量离子，进行外标法定量分析，以峰面积和工作标准溶液浓度绘制标准工作曲线，为减少基质对定量测定的影响，需用空白样提取液来配制标准工作溶液,并保证所测样品中各激素类物质的响应值均在线性范围内。