[发明专利]一种高活性蚓激酶的制备方法有效
| 申请号： | 201110103216.7 | 申请日： | 2011-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN102242099A | 公开（公告）日： | 2011-11-16 |
| 发明（设计）人： | 马广智;王高锋;梁学世;黄儒强;陈孔亮;潘淦;林盛;张璋;虞为;彭乐;武佳韵;陈世文;张涛;郭文康;陈纯纯;芦双;高艳明;赵盼盼;黄陈玲;邓金鹏 | 申请（专利权）人： | 华南师范大学 |
| 主分类号： | C12N9/48 | 分类号： | C12N9/48 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 裘晖;杨晓松 |
| 地址： | 510630 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高活性蚓激酶的制备方法，其包括以下步骤：(1)将蚯蚓洗净，加入磷酸盐缓冲液，捣碎，过滤取滤液，再离心，取上清液；(2)超滤，得到粗酶液；(3)硫酸铵分级沉淀，用磷酸盐缓冲液溶解沉淀，得到酶液；(4)将酶液上Sephadex G-25柱纯化；(5)再上DEAE-纤维素柱纯化，得到高活性蚓激酶。本发明以餐厨垃圾干粉喂养蚯蚓，再从蚯蚓中提取蚓激酶，实现了餐厨垃圾资源化利用和附加值的转移；对传统的酶分离纯化方法进行改进优化，提取纯化的蚓激酶比酶活达42000U/mg，达到制药用酶的要求；本发明方法具有操作简便、成本低廉的特点，易于工业化放大生产。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 活性 激酶 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种高活性蚓激酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将蚯蚓洗净，加入磷酸盐缓冲液，捣碎，过滤取滤液，得到蚯蚓粗蛋白溶液，再进行离心，取上清液；(2)将步骤(1)所得上清液进行超滤，得到粗酶液；(3)4℃下，向粗酶液中加入硫酸铵，使粗酶液中硫酸铵的饱和度达到20‑45％，静置3.5‑4h，然后离心，取上清液；往上清液中继续加入硫酸铵，使上清液中硫酸铵的饱和度增加到50‑75％，静置3.5‑4h，然后离心，收集沉淀，用磷酸盐缓冲液溶解沉淀，得到酶液；(4)将酶液上Sephadex G‑25柱，以磷酸盐缓冲液为洗脱液洗脱，自动部分收集器收集洗脱液，每管10ml，测定每管洗脱液的OD280nm值，计算每管洗脱液中的蛋白质含量，合并出现峰值的各管洗脱液；(5)将步骤(4)得到的洗脱液上DEAE‑纤维素柱，然后用0.1M的NaCl溶液进行淋洗，再用0.1‑0.6M的NaCl溶液进行梯度洗脱，自动部分收集器收集洗脱液，每管10ml，测定每管洗脱液的OD280nm值，计算每管洗脱液中的蛋白质含量，合并出现峰值的各管洗脱液，得到高活性蚓激酶；步骤(4)和(5)所述洗脱的流速为2ml/mim。
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