[发明专利]一种中药复方有效药味的筛选方法

摘要

一种中药复方有效药味的筛选方法，以本院制剂愈肾颗粒为例，根据中医病机，拆成小复方三组，第一组黄芪400g、丹参200g、白花蛇舌草320g；第二组黄芪400g、紫草320g、益母草320g；第三组黄芪400g、白茅根320g和小蓟320g组成；药味三组每组三味中药材。应用血清药理学方法分别制备药理血清，模拟药物在人体内代谢过程，此过程可应用与任何合理药物剂量及中药复方制剂的药味筛选。做相应体外肾小球系膜细胞培养实验，检测干预后的药理血清对靶器官和靶细胞的影响，通过对细胞因子及相关酶类的基因、蛋白的测定结果、对组方进行验证，筛选出有效药味。

主权项

一种中药复方有效药味的筛选方法，其特征在于包括下述步骤：（1）、以中医病机、组方原则及功效作为处方优化的依据，针对病机以功效为路径进行拆方，以血清药理学方法及细胞体外培养方法为途径，以细胞因子及其酶类为效应指标，进行拆方并筛选出有效药味，该方法包括：①、以具有明确防治肾小球硬化药效的专利处方、院内制剂—愈肾颗粒为例，根据中医病机、组方原则拆方重组为小复方，三组每组三味中药材、药对三组每组三味中药材，此拆方重组方法适用于各种中药复方；该例药原组方为：黄芪400g、生地黄320g、牡丹皮240g、丹参240g、紫草320g、白茅根320g、小蓟320g、益母草320g、芡实320g、太子参160g、甘草240g、鸡冠花160g和白花蛇舌草320g；按益气化瘀解毒、益气化瘀和益气解毒细化拆出第一复方、第二复方和第三复方：所述第一复方，即益气化瘀解毒组方，由中药材黄芪400g、丹参240g和白花蛇舌草320g组成；所述第二复方，即益气化瘀组方，是由中药材黄芪400g、紫草320g和益母草320g组成；所述第三复方，即益气解毒组方，是由中药材黄芪400g、白茅根320g和小蓟320g组成；应用血清药理学方法，分别制备第一复方、第二复方和第三复方药理血清和正常组（即原处方）药物血清，并按照实验方案灌胃，采血，具体办法为：第一复方、第二复方和第三复方中药的制备：将第一复方、第二复方和第三复方的上述中药材分别放入容器内，用冷水浸泡30分钟，然后分别煎煮三次，煎煮方法为：先武火煮沸后文火保持微沸状态30分钟，将药液滤出，重新加水煎煮，沸后文火保持20分钟，过滤，合并滤液，浓缩至所需浓度，即得；第一复方为300%、第二复方为270%、第三复方为315%；②、应用血清药理学方法，分别制备药理血清，通过此方法来模拟药物在人体内代谢过程，此过程可应用于任何合理药物剂量及中药复方制剂的药味筛选；③、做相应体外肾小球系膜细胞培养实验，用血管紧张素Ⅱ造肾小球系膜细胞增殖模型后，用药理血清干预，直接针对靶器官、靶细胞，通过此方法来减少实验过程中对药物的干预因素，应根据具体方案选择靶细胞进行体外实验；④、应用ELISA法检测体外培养的肾小球系膜细胞中模型组纤维连接蛋白FN、Ⅳ型胶原的含量，以判断造模是否成功；⑤、检测干预后药理血清对靶器官、靶细胞的影响，分别从基因含量RT‑PCR、蛋白表达western‑blot、细胞增殖情况MTT或流式细胞仪角度分析筛选有效药味；⑥、通过对细胞因子及相关酶类MMP3、MMP2、TIMP1、TIMP2的基因、蛋白的检测结果，对组方进行验证，筛选出有确切疗效的药味；⑦、通过优化设计、系统研究和反复验证，最终建立适用于中医药复方的有效药味的处方优化技术，得到新的中药药味。