[发明专利]小鼠原位左肺移植模型及其构建方法

摘要

本发明属于医学动物模型技术领域，具体为一种小鼠原位左肺移植模型及其构建方法。作为一种研究工具，该模型复制急性肺损伤、慢性免疫损伤、肺纤维化等疾病过程，主要用于肺移植领域，也可用于免疫学、病理生理学等学科中的一些领域。该模型的构建步骤包括：制备套管；建立供肺灌注系统；小鼠麻醉、气管内插管与机械通气；供者手术，获取供肺；供肺放置套管；受者手术，胸腔内左肺原位移植。本发明在建立供肺灌洗系统，在小鼠气管内插管、供肺灌洗、放置套管、套管法吻合肺血管支气管等方面均进行重要改进。实践表明，本发明比现有方法更容易掌握、操作，受个人因素的影响也更低，更接近动物模型“操作简单、可重复性好”的理想状态。

主权项

一种小鼠原位左肺移植模型构建方法，其特征在于具体步骤如下： （1）、制备套管 左肺支气管、肺静脉、肺动脉所用套管分别由18/20G、20G、24G血管导管制备；支气管、肺静脉套管体长1.0mm，肺动脉套管体长0.5mm；套管延伸柄长1.0mm，宽度占1/4～1/3管壁周径；具体操作是：血管导管用砂纸打磨后，24G导管切成1.5mm小段，其余型号切成2.0mm小段；将显微血管镊的一个尖头插入小段管腔，以其内侧面为切割平面，用刀片横向和纵向切割，做出套管的延伸柄；（2）、建立供肺灌洗系统  稳定提供与正常肺动脉压相当的灌洗压力；具体操作是：依次连接50ml针筒、输液器、22G血管套管，针筒固定于15‑‑25cm高度，注入肺保存溶液的冰水混合物，并使其充满管路；（3）、小鼠麻醉、气管内插管与机械通气适度麻醉，用“两端固定、中间拉开”法快速经口气管插管，建立机械通气；具体操作是：腹腔注射麻醉；小鼠上颚用橡皮筋固定于泡沫塑料板，胸骨上部用左手环指抵住，左手拇指和食指牵拉舌头，暴露声门；右手持20G血管导管接近声门，在其开启瞬间轻轻插入；连接呼吸机输出管路，根据小鼠体重大小提供0.5～1.0 ml潮气量，呼吸频率120～140/min；（4）、供者手术，获取供肺采用独特的供肺灌洗系统，借助简单操作完全清除供肺血管床内血液；具体操作是：建立机械通气后，胸腹正中切口开胸；将100U/0.1ml肝素钠稀释液在供者心尖处注入右心室；左手持显微蚊式钳夹住心脏下1/3处、但不上齿，小指勾住供肺灌洗系统的输液器下端、使22G导管尖端恰好抵在右心上；打开输液器控制装置，将喷涌肺保存液的22G导管插入右心室；用眼科剪迅速剪开膨胀的左右心耳、腹腔动静脉，使灌洗液和血液快速流出；两肺数秒钟之后变白，在半充气状态下用显微蚊式钳夹闭气管，自上而下锐性解剖，将心肺块完整取出，生理盐水冲洗后置于铺有纱布的培养皿中，肺保存液制成的冰块恰使纱布浸透；（5）、放置套管，准备移植肺游离、切断血管和支气管，用“先套管、后固定”法为其分别放置套管；具体操作是：在手术显微镜下，左肺静脉、动脉、支气管全长游离、在尽可能靠近总干处切断；显微镊两尖并拢穿过肺静脉套管，牵拉肺静脉残端，在另一把显微镊的协助下将套管套上并推向左肺静脉远端，延伸柄指向后肺门；左手显微镊夹住肺静脉，尽可能靠近其远端，右手用微血管夹把套管柄及肺静脉一并夹住，蚊式钳夹住微血管夹尾部并搁在培养皿边沿上，以稳定微血管夹；将肺静脉残端像卷袖口那样翻转，套在套管的外面，然后用10‑0单纤尼龙线固定；用同样方法给肺动脉放置套管，然后心肺块用纱布覆盖后4℃冰箱保存；冷藏期间供肺保持半充气状态、整个气道保持完全封闭状态，以维持供氧、并防止保存液流入供肺；在吻合操作前，同样方法放置支气管套管；（6）、受者手术，胸腔内左肺原位移植采用吻合张力最低的前肺门入路、吻合口的口径和张开度俱佳的“T”形吻合口，依次吻合左肺静脉、动脉和支气管；具体操作是：受者以同样方法麻醉并建立机械通气，左胸后外侧切口，第3肋间进胸，将受者左肺从切口后部牵出胸腔，在肺血管进入肺实质处用显微蚊式钳夹住，以作牵拉之用；从肺门前入路，全程游离左肺门血管及支气管，用3‑0丝线打活结暂时阻断血管、微血管夹阻断支气管，尽可能靠近根部；移植肺放入下胸腔，使供肺套管结构在无张力状态下贴近受者肺门；用10‑0线环绕肺静脉并预留一个线结，先切开肺静脉远端前壁1/3周径、做横切口，然后纵向切开切口远端的肺静脉前壁，做成“T”形切口；切口内注入肝素稀释液，用显微镊将“T”形切口的横切缘牵开、使之呈袋状，用显微镊持住供者肺静脉套管的延伸柄，沿着“T”形切口的纵切口轻轻滑入，将套管结构送入一个合适的位置；在收紧线结之前，血管壁自身弹性可使肺静脉套管保持原位；肺静脉吻合成功后，依次吻合支气管和肺动脉；全部吻合成功后，剪掉套管延伸柄，依次开放肺静脉、肺动脉和支气管，然后切断肺血管支气管吻合时未剪断的后壁，将移植肺纳入胸腔；清理胸腔内积液及组织碎屑，在深吸气屏气状态下关闭胸腔。