[发明专利]用于生产外源蛋白的山羊β-乳球蛋白基因座打靶载体构建方法

摘要

本发明公开了一种用于生产外源蛋白的山羊β-乳球蛋白基因座打靶载体构建方法，以山羊β-乳球蛋白基因5’端调控序列BLG5作为5’端同源臂，以山羊β-乳球蛋白基因3’端包含第6、第7外显子及下游的序列BLG3作为3’端同源臂，以第5外显子和第5内含子的部分序列E5作为连接序列用以将正筛选标记基因置于第5内含子中；将BLG5、目的基因及E5顺次连接，再和BLG3分别连接到通用型打靶载体中正筛选标记两侧。在需要时可以将目标蛋白的基因组DNA或cDNA序列插入到该通用打靶载体的目的基因位置处或直接置换掉原来的目的基因，然后用所获得的打靶载体转染山羊胎儿成纤维细胞或其他细胞，筛选出中靶的细胞，通过体细胞核移植技术获得能在乳腺中生产目标蛋白的转基因山羊。

主权项

用于生产外源蛋白的山羊β‑乳球蛋白基因座打靶载体构建方法，其特征在于，以山羊β‑乳球蛋白基因5’端调控序列BLG5作为5’端同源臂，以山羊β‑乳球蛋白基因3’端包含第6、第7外显子及下游的序列BLG3作为3’端同源臂，以第5外显子和第5内含子的部分序列E5作为连接序列用以将正筛选标记基因置于第5内含子中；将BLG5、目的基因及E5顺次连接，再和BLG3分别连接到通用型打靶载体中正筛选标记两侧。