[发明专利]一种检测RNA病毒hMPV的方法、试剂盒及应用

摘要

本发明涉及一种检测RNA病毒hMPV的方法及试剂盒，具体讲涉及一种利用逆转录等温扩增技术检测RNA病毒hMPV的方法及试剂盒。该检测方法为：根据人偏肺病毒的N基因的相对保守区，分别设计了六条引物，包括两条外引物F3、B3和两条内引物FIP、BIP，两条环结合引物LF、LB；处理待测标本，提取样本的RNA后，进行RT-LAMP反应；然后通过电泳检测或肉眼观察，最终得到结果。本发明建立了hMPVN基因的RT-LAMP检测方法，灵敏度可以达到10个拷贝，灵敏度远高于传统PCR方法，并且该方法还具有良好的特异性，不与RSV，HBoV和H1N1的核酸发生交叉反应。

主权项

一种利用逆转录等温扩增技术检测RNA病毒hMPV的方法，其特征在于，所述的检测方法包括以下步骤：根据人偏肺病毒的N基因的相对保守区，分别设计了六条引物，包括两条外引物F3、B3和两条内引物FIP、BIP，两条环结合引物LF、LB；处理待测标本，提取样本的RNA后，进行RT‑LAMP反应；然后通过电泳检测或肉眼观察，最终得到检测结果；其中，所述的引物的核苷酸序列为：外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，或由SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列经取代、缺失、添加形成的核苷酸序列；，外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，或由SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列经取代、缺失、添加形成的核苷酸序列：内引物FIP(F1c+F2)的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，或由SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列经取代、缺失、添加形成的核苷酸序列：内引物BIP(B1c+B2)的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示，或由SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列经取代、缺失、添加形成的核苷酸序列：环引物LF的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示，或由SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列经取代、缺失、添加形成的核苷酸序列：环引物LB的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示，或由SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列经取代、缺失、添加形成的核苷酸序列。