[发明专利]一种农杆菌介导的日本结缕草遗传转化方法无效
| 申请号： | 201110119725.9 | 申请日： | 2011-05-10 |
| 公开（公告）号： | CN102776231A | 公开（公告）日： | 2012-11-14 |
| 发明（设计）人： | 韩烈保;代小梅;孙鑫博;王怡杰 | 申请（专利权）人： | 北京林业大学 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王加岭;张庆敏 |
| 地址： | 100083 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种农杆菌介导的日本结缕草遗传转化方法，其是用悬浮于AAM-AS培养基中的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)侵染日本结缕草的愈伤组织，将侵染后的愈伤组织置于N6D2-AS培养基中共培养2-3天，最后洗去根癌农杆菌，筛选并培养愈伤组织。本发明针对农杆菌介导日本结缕草遗传转化体系影响转化效率的三大重要影响因子，摸索出最佳菌液浓度(OD600值为0.3-0.4)，侵染时间(1.5-2h)及共培养时间(2-3天)。结合培养基的改良，最终转化效率达到50％以上；另外，本发明通过改进农杆菌清洗方法，使在筛选培养的过程中排除了农杆菌的污染，与以往的农杆菌介导转化方法相比，大大减少了工作量，节约了成本，避免了愈伤材料的浪费。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 杆菌 日本 结缕草 遗传 转化 方法 | ||
【主权项】：
一种农杆菌介导的日本结缕草遗传转化方法，其特征在于，包括步骤：1)当根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的菌液OD600值为0.3‑0.4时，离心收获菌体，然后向菌体中加入pH值为5.2的AAM‑AS培养基悬浮菌体；2)用悬浮于AAM‑AS培养基中的根癌农杆菌侵染日本结缕草的愈伤组织，将侵染后的愈伤组织置于pH值为5.2的N6D2‑AS培养基中共培养2‑3天，最后洗去根癌农杆菌，筛选并培养愈伤组织。
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