[发明专利]家蚕丝腺细胞合成分泌狂犬病病毒糖蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种家蚕丝腺细胞合成分泌狂犬病病毒糖蛋白的方法。是先构建家蚕合成分泌狂犬病病毒糖蛋白RVGP的载体pBSer1RVGP-A3EGFP质粒和pBFibLRVGP-A3EGFP质粒，再利用显微注射转基因家蚕技术将这2种质粒分别与能够提供转座酶的辅助质粒一起导入到家蚕受精卵内，依靠piggyBac转座子的转座特性，使绿色荧光蛋白基因和狂犬病病毒糖蛋白基因导入到家蚕的基因组内，并得到稳定遗传和表达，从而创制家蚕中部丝腺生物反应器、后部丝腺生物反应器、以及丝腺生物反应器三种生物反应器，育成家蚕中部丝腺细胞、后部丝腺细胞或两部分丝腺细胞能够特异性合成分泌狂犬病病毒糖蛋白的转基因家蚕新品种。

主权项

一种家蚕丝腺细胞合成分泌狂犬病病毒糖蛋白的方法，其特征在于该方法的步骤如下：（1）采用分子生物学技术构建家蚕合成分泌狂犬病病毒糖蛋白的载体pBSer1RVGP A3EGFP质粒和pBFibLRVGP A3EGFP质粒； （2）采用显微注射转基因家蚕方法将pBSer1RVGP A3EGFP质粒或pBFibLRVGP A3EGFP质粒与能够提供转座酶trans的辅助质粒一起导入家蚕受精卵内，蚕卵孵化后饲养至成虫，自交续代为G1代，在G1代转基因家蚕的小蚕期，采用转基因昆虫荧光基因表达相对量无损伤测定方法，观察选择表达EGFP标志基因的转基因家蚕，饲养至成虫自交续代为G2代，G2代以后均采用蛾区育，成虫自交续代，再经1 3代选种，每代在小蚕期采用转基因昆虫荧光基因表达相对量无损伤测定方法，以表达EGFP标志基因为留种筛选标志，创制家蚕中部丝腺生物反应器和后部丝腺生物反应器，育成中部丝腺细胞、后部丝腺细胞能够特异性合成分泌狂犬病病毒糖蛋白、基因纯合的转基因家蚕新品种；（3）在中部丝腺细胞能够特异性合成分泌狂犬病病毒糖蛋白、基因纯合的转基因家蚕新品种的基础上，采用显微注射转基因家蚕方法将pBFibLRVGP A3EGFP质粒与能够提供转座酶trans的辅助质粒一起导入该家蚕品种受精卵内，在后部丝腺细胞能够特异性合成分泌狂犬病病毒糖蛋白、基因纯合的转基因家蚕新品种的基础上，采用显微注射转基因家蚕方法将pBSer1RVGP A3EGFP质粒与能够提供转座酶trans的辅助质粒一起导入该家蚕品种受精卵内，受精卵孵化后饲养至成虫，自交续代为GG1代，在GG1代转基因家蚕的小蚕期，采用转基因昆虫荧光基因表达相对量无损伤测定方法，观察选择表达EGFP标志基因的转基因家蚕，饲养至成虫自交续代为GG2代，GG2代以后均采用蛾区育，成虫自交续代，再经2代选种，每代在小蚕期采用转基因昆虫荧光基因表达相对量无损伤测定方法，以表达EGFP标志基因为留种筛选标志，创制家蚕丝腺生物反应器，育成中部丝腺细胞、后部丝腺两部分细胞都能够特异性合成分泌狂犬病病毒糖蛋白、基因纯合的转基因家蚕新品种； （4）将中部丝腺细胞能够特异性合成分泌狂犬病病毒糖蛋白、基因纯合的转基因家蚕新品种，与后部丝腺细胞能够特异性合成分泌狂犬病病毒糖蛋白、基因纯合的转基因家蚕新品种杂交为F1代，在F1代转基因家蚕的小蚕期，采用转基因昆虫荧光基因表达相对量无损伤测定方法，观察选择表达EGFP标志基因的转基因家蚕，饲养至成虫自交续代为F2代，F2代以后均采用蛾区育，成虫自交续代，再经2代选种，每代在小蚕期采用转基因昆虫荧光基因表达相对量无损伤测定方法，以表达EGFP标志基因为留种筛选标志，创制家蚕丝腺生物反应器，育成中部丝腺细胞、后部丝腺两部分细胞都能够特异性合成分泌狂犬病病毒糖蛋白、基因纯合的转基因家蚕新品种。