[发明专利]一种结合SOLID测序和单细胞RT-PCR的人抗体可变区获取方法无效
| 申请号： | 201110124292.6 | 申请日： | 2011-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN102787118A | 公开（公告）日： | 2012-11-21 |
| 发明（设计）人： | 孙毅;曾桥;史占平;梁爱斌 | 申请（专利权）人： | 孙毅;曾桥;史占平;梁爱斌 |
| 主分类号： | C12N15/13 | 分类号： | C12N15/13;C12N15/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 215219 江苏省苏州市高新区泰山*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供一种结合SOLID测序和单细胞RT-PCR的人抗体可变区获取方法。通过细胞表面分子标记筛选表达特异抗体的单细胞，将单细胞mRNA进行一次反转录，获得cDNA序列，然后用我们设计的IgG/M特异引物群进行一次PCR扩增，以扩增的产物作为模板，再用SOLID测序引物(Barcoded Primers)进行一次PCR。最后取Barcoded Primers扩增产物作为模板，进行SOLID测序，测序的结果进行生物信息学分析，即可获得人类抗体可变区基因序列。本发明可广泛用于获取多种疾病中特异性抗体的重链和轻链可变区序列，其快速，高效的优势为全人源化抗体药物的生产提供了一个有效手段。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 结合 solid 单细胞 rt pcr 抗体 可变 获取 方法 | ||
【主权项】：
一种结合SOLID测序和单细胞RT‑PCR的人抗体可变区获取方法，其特征在于，所述方法步骤如下：(1)从特异免疫力供体获取抗凝外周血；(2)分离外周血单核细胞(PBMCs)；(3)以CD3‑和CD19+为gate对PBMCs进行初次分选；(4)以CD27high和CD38high为gate对初次分选的细胞再次分选；(5)获取具有抗体分泌功能的浆细胞，并稀释成单细胞；(6)裂解单细胞并进行反转录获得单细胞cDNA序列；(7)IgG/M特异引物PCR扩增；(8)Barcode Primer测序引物PCR扩增；(9)SOLID芯片测序，生物信息学分析，获得抗体可变区基因序列。
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