[发明专利]一种高效结合IgG的重组蛋白A及其工程菌的构建方法无效
| 申请号： | 201110124915.X | 申请日： | 2011-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN102373225A | 公开（公告）日： | 2012-03-14 |
| 发明（设计）人： | 夏海锋;吴璞强;金雄华;饶志明 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/31 | 分类号： | C12N15/31;C12N15/63;C12N1/21;C07K14/31;C07K1/22;C07K16/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高效结合IgG的重组蛋白A及其工程菌的构建方法。根据NCBI公布的基因序列对金黄色葡萄球菌蛋白A的IgG抗体结合区E、D、A、B、C区域设计重组蛋白A引物，并在C端引物中添加一个半胱氨酸密码子。以金黄色葡萄球菌的基因组为模板，扩增得到编码重组蛋白A抗体结合区的基因(spa)，将其与质粒pMD18-T连接，转化感受态E.coil JM109，得到大量重组质粒pMD18-T-spa，从而保存基因和增加基因的拷贝数。提取重组质粒，用Noc I和BamH I对重组质粒和质粒pET-28a进行双酶切，连接重组质粒pET-28a-spa，转化感受态E.coil BL21，添加终浓度1mmol/L的IPTG于30℃诱导表达，经SDS-PAGE验证表达成功。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高效 结合 igg 重组 蛋白 及其 工程 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种高效结合IgG的重组蛋白A及其工程菌的方法，其特征是根据NCBI公布的基因序列利用DNAMAN对蛋白A的五个IgG抗体结合区E、D、A、B、C区域设计引物，并在蛋白A的C端引物上添加了一个半胱氨酸，做为亲和层析的配基使用时利用半胱氨酸的巯基结合活化介质，增加蛋白A对IgG的吸附容量。
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