[发明专利]利用akirin2基因序列制备鸡基因工程免疫增强剂的方法

摘要

利用akirin2基因序列制备鸡基因工程免疫增强剂的方法，它涉及制备鸡基因工程免疫增强剂的方法。它解决了现有基因工程免疫增强核酸疫苗存在不能够广泛的提高疫苗、菌苗免疫效果的问题。方法：获得鸡akirin2基因编码序列；获得含鸡akirin2基因的重组pMD18-T载体；设计引物并使5′-端分别带有HindIII和EcoRI酶切位点，将重组pMD18-T载体中的鸡akirin2基因亚克隆到表达载体中构建成重组表达载体；无菌PBS缓冲液稀释重组表达载体即完成。本发明中鸡基因工程免疫增强剂可提高机体IL-1、IL-6和toll-样受体等多种免疫相关因子表达水平，具有对各种疫苗、菌苗适用面广等特点。

主权项

利用akirin2基因序列制备鸡基因工程免疫增强剂的方法，其特征在于利用akirin2基因序列制备鸡基因工程免疫增强剂的方法按以下步骤进行：一、利用NCBI中红原鸡的EST数据库，以人的akirin2基因编码序列为靶标，利用BLAST软件进行电子克隆，获得鸡akirin2基因全长编码序列；二、采用Trizol试剂提取3日龄雏鸡骨骼肌的总RNA，采用二步法RT‑PCR技术获得鸡akirin2基因全长编码序列，经纯化后克隆到载体pMD18‑T并测序鉴定，获得含鸡akirin2基因的重组pMD18‑T载体；三、根据鸡akirin2基因全长编码序列，设计引物P1和P2，并使引物P1和P2的5′‑端分别带有HindIII和EcoRI酶切位点，然后将重组pMD18‑T载体中的鸡akirin2基因亚克隆到表达载体pcDNA3.0中构建成重组表达载体pcDNA‑akirin；四、采用0.1mol/L的无菌PBS缓冲液稀释重组表达载体pcDNA‑akirin至浓度为1.0μg/μl，于‑20℃保存，即完成利用akirin2基因序列制备鸡基因工程免疫增强剂；其中步骤二中鸡akirin2基因全长编码序列如SEQ ID No.1所示；步骤三中引物P1的核苷酸序列为：5′‑CCCAAGCTTATGGCGTGCGGCGCCACTTTG‑3′，引物P2的核苷酸序列为：5′‑CGGAATTCTCATGAAACGTAACTGGCAGG‑3′；步骤四中PBS缓冲液：NaCl 137mmol/L、KCl 2.7mmol/L、Na2HPO410mmol/L、KH2PO42mmol/L，pH为7.2。