[发明专利]一种含有loxP-kanr-loxP片段的重组质粒载体p18-kan±的构建方法

摘要

一种含有loxP-kanr-loxP片段的重组质粒载体p18-kan±的构建方法，它涉及一种重组质粒载体的构建方法。方法：1、从pUG6质粒中获得loxP-kanr-loxP片段；2、以pMD18-T载体作为骨架，通过T-A末端连接获得连接产物；3、连接产物转化感受态细胞，挑取阳性克隆，提取重组质粒即完成。本发明利用pMD18-T载体作为模板，向其多克隆位点上引入loxP-kanr-loxP基因片段，同时构建出一对连接方向相反的重组质粒，质粒loxP-kanr-loxP位点两端具有多个常用酶切位点，外源基因便于与loxP-kanr-loxP片段连接，为真核生物基因敲除、替换提供了新的操作途径。

主权项

一种含有loxP‑kanr‑loxP片段的重组质粒载体p18‑kan±的构建方法，其特征在于含有loxP‑kanr‑loxP片段的重组质粒载体p18‑kan±的构建方法按以下步骤进行：一、采用PCR技术从pUG6质粒中获得loxP‑kanr‑loxP片段；二、胶回收1.6Kb的loxP‑kanr‑loxP片段，然后以2.7Kb的pMD18‑T载体作为骨架，通过T‑A末端连接，获得连接产物；三、连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，然后涂布于氨苄抗性的LB固体培养基中进行培养，挑取阳性克隆，接种于氨苄抗性的LB液体培养基中震荡培养后采用碱裂解法提取重组质粒，即完成含有loxP‑kanr‑loxP片段的重组质粒载体p18‑kan±的构建。