[发明专利]假肥大型肌营养不良症致病基因突变检测试剂盒及应用

摘要

本发明公开了一种检测假肥大型肌营养不良症致病基因DMD基因是否发生突变的试剂盒。该试剂盒的主要成分包括：（1）DMD基因第1到第79外显子区PCR扩增与测序引物79对，（2）PCR扩增试剂，（3）PCR产物纯化试剂，（4）DNA测序试剂。本发明的试剂盒用于检测假肥大型肌营养不良症致病基因DMD的突变体，可以快速方便地查出致病基因的携带者以及病人，可应用于产前诊断、阻止患儿出生，降低假肥大型肌营养不良症的发病率。

主权项

一种检测假肥大型肌营养不良症致病基因DMD基因是否发生突变的试剂盒，其特征在于包括以下成分：（1）DMD基因第1到第79外显子区PCR扩增与测序引物79对，（2）PCR扩增试剂，（3）PCR产物纯化试剂，（4）DNA测序试剂；所述的79对引物序列如下：第1对：     F:5’‑ tggcgaggaactctactattg ‑3’，R:5’‑ ttgaagagctcggcaacaa ‑3’第2对：     F:5’‑ aagtgatccgtcctcactgg ‑3’，R:5’‑ ccatatcttctgctgcttactcc ‑3’第3对：     F:5’‑ tcggcagattaattatgcacac ‑3’，R:5’‑ tctgcaggcggtagagtatg ‑3’第4对：     F:5’‑ atgcctcacaggctctgttc ‑3’，R:5’‑ ccacaatcaggcatacacga ‑3’第5对：     F:5’‑ aagcttcaatgctaagtctctga ‑3’，R:5’‑ cagacgacatggtagtgtcaat ‑3’第6对：     F:5’‑ tggcatagataccaatgaatcag ‑3’，R:5’‑ ggacatgatctggaaccatactg ‑3’第7对：     F:5’‑ ttacactcaagacttaaggactatgg ‑3’，R:5’‑ agtgcaagaaggctgaacatt ‑3’第8对：     F:5’‑ gacattcatggacaattcactg ‑3’，R:5’‑ atgaatattgtagtcaatgaagcaa ‑3’第9对：     F:5’‑ tgatattaagtgccttcattctgg ‑3’，R:5’‑ ccagctcttcacgaggagataa ‑3’第10对：   F:5’‑ tgccagtggacagtcctagc ‑3’，R:5’‑ aatgccttcaatggttgctc ‑3’第11对：   F:5’‑ gcctgcttctgaagaacttg ‑3’，R:5’‑ tgagaatcgtaacttaaccatcaa ‑3’第12对：   F:5’‑ ccttctcaatgtccaatagatgc ‑3’，R:5’‑ ccatcaaccatgtcatctgtg ‑3’第13对：   F:5’‑ ggagtacctgagatgtagcagaa ‑3’，R:5’‑ cacagcacttcagctgattatga ‑3’第14对：   F:5’‑ ccttccaacttctagcgtaca ‑3’，R:5’‑ ttgaataatctatgatccaagcaa ‑3’第15对：   F:5’‑ ccaagatccgtgccttctaa ‑3’，R:5’‑ tcaccaccattctccaacaa ‑3’第16对：   F:5’‑ aaggtcaatctaccaacaagcaa ‑3’，R:5’‑ tctcactacattaactgacattacagg ‑3’第17对：   F:5’‑ agaggtgtcaggcaggagtc ‑3’，R:5’‑ cctagtcagtcacagaagaatcca ‑3’第18对：   F:5’‑ cacgtgataagctgacagagtga ‑3’，R:5’‑ ttaacaagtgcttgtctgatataattc ‑3’第19对：   F:5’‑ ttgttgtgacgcaagtctga ‑3’，R:5’‑ cacaatcaattagcgctgtg ‑3’第20对：   F:5’‑ ggctggtgatagaggcttgt ‑3’，R:5’‑ ttcgttccttgttaatacaggttg ‑3’第21对：   F:5’‑ ggcatattacacatgtagcagga ‑3’，R:5’‑ ttgagaatgtgacaggagttacaa ‑3’第22对：   F:5’‑ tcatctactttgtttacatgtttgaa ‑3’，R:5’‑ taagcaaatcgccatccttt ‑3’第23对：   F:5’‑ gacttcacacaccagtgctca ‑3’，R:5’‑ caccagtagcatctaaccacca ‑3’第24对：   F:5’‑ atccatatgcaatgccatca ‑3’，R:5’‑ aggaacaaagccttaaccaaa ‑3’第25对：   F:5’‑ tcacacttatgggaaattgagtg ‑3’，R:5’‑ gaaccaggaaagagcagactgt ‑3’第26对：   F:5’‑ ctgggatgttgtgagaaagaaa ‑3’，R:5’‑ gaatgaggaattcaagccaaa ‑3’第27对：   F:5’‑ acctgctacaaagtaaaggtgaa ‑3’，R:5’‑ aagtaccagtgctgagtgataacat ‑3’第28对：   F:5’‑ ccgcaacactgtcataatcc ‑3’，R:5’‑ tggcattggattgtctctga ‑3’第29对：   F:5’‑ ggaagctgcgaaatctgtct ‑3’，R:5’‑ cctccaaatagtcaaatcagtgaa ‑3’第30对：   F:5’‑ ggtggttgaggagagtttctg ‑3’，R:5’‑ ctcaaatccaatcttgccaat ‑3’第31对：   F:5’‑ tcctgtgttggatgaatgga ‑3’，R:5’‑ gccacaatacatgtgccaat ‑3’第32对：   F:5’‑ tcaaacatggaatagcaattaagg ‑3’，R:5’‑ gagagagagaggtgtttagaattgc ‑3’第33对：   F:5’‑ ggacaaacgatgtcatctgc ‑3’，R:5’‑ tcctgctaaagcttaccattg ‑3’第34对：   F:5’‑ aaccttgcagaatcatagtaacca ‑3’，R:5’‑ gggaaagataaaggaaggaagaa ‑3’第35对：   F:5’‑ tcttctcgctcacttgctca ‑3’，R:5’‑ gggaggagtggcgtttatct ‑3’第36对：   F:5’‑ ttagcaacaggaggttgaataaa ‑3’，R:5’‑ ccataccatagtaattcagcatttg ‑3’第37对：   F:5’‑ gaaaggctatgagcacagtatctta ‑3’，R:5’‑ ttctgatgactaagtctgaagcagat ‑3’第38对：   F:5’‑ aaagatgagggacgcaaatta ‑3’，R:5’‑ caaggaaatgcatcaaatcaaa ‑3’第39对：   F:5’‑ aagggacaacagcctttgaa ‑3’，R:5’‑ aagcccaaagtgagggaaac ‑3’第40对：   F:5’‑ ttcagcccagtttgtagattca ‑3’，R:5’‑ agatttctgaagccaaccaca ‑3’第41对：   F:5’‑ ttgcaacaccatttgctacc ‑3’，R:5’‑ ttcagctcatttgtctgaattg ‑3’第42对：   F:5’‑ aaactctgcaaatgcaggaaa ‑3’，R:5’‑ ttccatcacccttcagaacc ‑3’第43对：   F:5’‑ ttctttgccagtacaactgcat ‑3’，R:5’‑ tagtgcctttcaccctgctt ‑3’第44对：   F:5’‑ aaattgccatgtttgtgtcc ‑3’，R:5’‑ gaactgcagggttaagaagaaa ‑3’第45对：   F:5’‑ ctcggtcaagtcgcttcatt ‑3’，R:5’‑ atccacataccagcctcctc ‑3’第46对：   F:5’‑ tgctgctaaaataacacaaatca ‑3’，R:5’‑ agtggtccctgtgcctattg ‑3’第47对：   F:5’‑ tgatctgcaatacatgtggagt ‑3’，R:5’‑ cactgattataaatagtccacgtca ‑3’第48对：   F:5’‑ tgcaaccacaatagatactcttcaa ‑3’，R:5’‑ tgctcttctcttccttgtgg ‑3’第49对：   F:5’‑ ttgtccaggcatgagaatga ‑3’，R:5’‑ acagttgcctaagaactggtg ‑3’第50对：   F:5’‑ tggctggtctcacaattgtact ‑3’，R:5’‑ ggagagactggcatctccat ‑3’第51对：   F:5’‑ tcctgttgttcatcatcctagc ‑3’，R:5’‑ atgattgtgccactgcactt ‑3’第52对：   F:5’‑ gacctgaggattcagaagctg ‑3’，R:5’‑ gtctgagccaagtccgtgag ‑3’第53对：   F:5’‑ tgtcattcttgcatgccttc ‑3’，R:5’‑ cctctgcctctctcctcctt ‑3’第54对：   F:5’‑ agaaggcaatacgccaagaa ‑3’，R:5’‑ ttacgtagacatgtgagataccagtt ‑3’第55对：   F:5’‑ tctcagcattctgcatgtgg ‑3’，R:5’‑ ttgttgatgtcttgatgagtacga ‑3’第56对：   F:5’‑ ggcattaactatccagaatgctc ‑3’，R:5’‑ ttgcaacaatagaattcctcctc ‑3’第57对：   F:5’‑ ttgtggtatgcatcctaacg ‑3’，R:5’‑ aataccatgtgaatgaagactgaa ‑3’第58对：   F:5’‑ tcctaataccattgccttaggtgt ‑3’，R:5’‑ tacagcctgcagaactgagc ‑3’第59对：   F:5’‑ aacgagtctggaatactatatacgg ‑3’，R:5’‑ atccaattggccttcctctt ‑3’第60对：   F:5’‑ cagcaggttaatccatcctgt ‑3’，R:5’‑ tgtaggccaggctaatgtcg ‑3’第61对：   F:5’‑ tgtagtgttccacattggatgg ‑3’，R:5’‑ ttggataggaaggtgccact ‑3’第62对：   F:5’‑ ttgtggtggttgtagttattgg ‑3’，R:5’‑ gcaacaggaattgtgacagc ‑3’第63对：   F:5’‑ tcatcaacttagagtcgaggcata ‑3’，R:5’‑ gcattaggtccacagcttcc ‑3’第64对：   F:5’‑ ccattgcattgtaggtcatca ‑3’，R:5’‑ catgaggaatctgctgtcaa ‑3’第65对：   F:5’‑ ttgagaattgctactggaattga ‑3’，R:5’‑ catacctactgcctactgaagagc ‑3’第66对：   F:5’‑ aagtctcgctcaggtgtgtagtt ‑3’，R:5’‑ taacagcaactggcacagga ‑3’第67对：   F:5’‑ ttccagtaccttcctacttaatctcaa ‑3’，R:5’‑ gcctacagttgagagcca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