[发明专利]一种猪链球菌7型高密度发酵培养基及专用菌株

摘要

本发明属于农业微生物技术领域，具体涉及一种猪链球菌7型株的分离筛选及发酵培养。分离得到一株猪链球菌7-YZ株菌，其保藏号为CCTCC NO：M2011160。其发酵工艺是：1)取猪链球菌7-YZ株斜面种子在TSA培养基平板上划线培养得到一级种子；2)接种一级种子单菌落至TSB培养基摇瓶中，使OD600至0.7～0.9，得二级种子；3)接种二级种子至摇瓶进行发酵培养，得到猪链球菌7-YZ菌液。本发明有利于猪链球菌7-YZ的生长代谢，菌体生长速度快，能获得较高菌量，培养猪链球菌7-YZ活菌数可达到60～70亿。生产成本比商用TSB培养基降低30～50％。

主权项

一种适用于猪链球菌(streptococcus suis)7‑YZ株的高密度发酵方法，其特征在于包含如下步骤：(1)制备一级种子：取保藏号为CCTCC NO：M2011160的猪链球菌7‑YZ在TSA平板上划线，置37℃培养16～24小时，然后挑取直径为0.1mm‑1.0mm，灰白色，半透明，表面光滑，圆形，边缘整齐的小菌落，接种TSA平板上，置37℃培养16～24小时，得到一级种子；(2)制备二级种子液：用接种环取一环步骤(1)的一级种子的单菌落，接种于TSB液体培养基中，置37℃摇床170rpm/min，培养6小时，使OD600至0.7～0.9，得到二级种子菌液；(3)发酵培养：取步骤(2)的二级种子菌液以V/V计为1～4％的接种量接入装有发酵培养基的摇瓶中进行发酵培养，控制摇床温度为37℃，转速为150～200rpm，起始pH为7.0～7.5，至发酵周期为8～10小时，得到猪链球菌7‑YZ菌液；或取步骤(2)的二级种子菌液以V/V计为1～4％的接种量接入装有按V/V计的发酵培养基的发酵罐中，控制发酵温度为37℃，通气量为0.5～1vvm，转速为100～200rpm，pH值至7.0～7.5，至发酵周期为6～8小时，得到猪链球菌7‑YZ菌液；其中：发酵培养基的组分如下：按g/L计：胰蛋白胨10‑30g/L，酵母粉10‑30g/L，(NH4)2SO4 1‑5g/L，MgSO4·7H2O0.1‑1.0g/L，K2HPO4·3H2O 5‑10g/L，KH2PO4 1‑5g/L，葡萄糖1‑10g/L，牛血清30‑100ml/L，余量是水；上述发酵培养基按以下步骤制备：A、按配方量，将胰蛋白胨，酵母粉，(NH4)2SO4，MgSO4·7H2O，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml；灭菌前调pH至7.0～7.6；在115～121℃高压蒸汽下灭菌15～25min，得到A液；B、称取葡萄糖100g，用蒸馏水定容至1000ml；在110～115℃高压蒸汽下灭菌15～25min，得到B液；C、称取K2HPO4·3H2O 22.8g，加蒸馏水定容至100ml，配制得到磷酸氢二钾溶液；称取KH2PO413.6g，用蒸馏水定容至100ml，配制得到磷酸二氢钾溶液；取磷酸氢二钾溶液84ml和磷酸二氢钾溶液16ml，使二者混合，得到磷酸盐缓冲溶液母液；在121℃高压蒸汽下灭菌15～25min；D、将步骤B的B液，步骤C的磷酸盐缓冲母液及牛血清按配方量加入到A液中，得到猪链球菌7‑YZ高密度发酵培养基；其中：步骤B中的B液的添加量按体积比计为1～10％，步骤C中的磷酸缓冲母液添加量按体积比计为3～9％，牛血清按体积比计的添加量为5～15％。