[发明专利]一种鉴定蜂蜜中主要转基因蜜源植物花粉的形态学方法

摘要

本发明涉及一种蜂蜜中主要转基因蜜源植物花粉鉴定的形态学方法。该方法包括如下操作步骤：（1）蜂蜜样品中花粉的分离；（2）制作花粉样品显微观察玻片；（3）花粉粒径测量；（4）花粉标准图谱的摄制；（5）蜜源植物的判别；本发明通过对棉花和油菜花粉显微形态的研究，建立标准花粉图谱，以显微镜检的方式快速排除不含上述作物花粉的蜂蜜，可用于快速甄别蜂蜜中是否还有转基因成分。

主权项

一种鉴定蜂蜜中主要转基因蜜源植物花粉的形态学方法，依序包括如下步骤：   （1）采用负压抽滤法和离心法分离蜂蜜样品中的花粉：a)负压抽滤法分离花粉:将蜂蜜样品稀释后负压抽滤后，用蒸馏水冲洗滤膜以除去糖分；将滤膜置于50mL离心管中，加入5mL蒸馏水在漩涡振荡器上激烈振荡1分钟，取出滤膜；3000 rpm离心30min，弃上清液，留0.5mL备用；b)离心法抽提花粉:将蜂蜜样品稀释、离心后，弃去上清液，加适量蒸馏水重新震荡悬浮，再次离心30分钟，弃去上清液，如此重复两次；最后剩下0.5mL花粉溶液备用；   （2）制作花粉样品显微观察玻片：a)油胶的制备：称取动物明胶1g置于50 mL小烧杯中，加入6 mL蒸馏水浸泡2小时，待其溶化后加入7mL甘油，加热并轻轻搅拌，尽量少产生气泡,至完全均匀后冷却备用；b)乙酸酐：硫酸混合液的配置：将27mL乙酸酐置于50 mL小烧杯中，搅拌中缓缓加入3mL浓硫酸，搅拌均匀备用；c)G.Erdtman乙酸酐分解法：将制备好的花粉先用2mL乙酸浸泡1‑2h，3000rpm离心10min，弃去乙酸，再加入乙酸酐：硫酸（9：1）混合液5mL，水浴煮沸2‑3分钟，3000rpm离心10分钟，弃上层溶液；加入5mL蒸馏水振荡使花粉重新悬浮，3000rpm离心10min，弃上层溶液；重复两次，剩下少量处理后花粉溶液备用；d)制片方法：将一小滴热水浴溶化的甘油胶滴在预先烤热的载玻片上，用移液器移取10μL花粉溶液或经乙酸酐分解后的花粉溶液，小心滴在甘油胶上，然后将盖玻片在酒精灯上烤热后迅速盖上；要求400倍显微镜下每个视野4‑8个花粉为宜；待甘油胶冷凝后用加拿大树胶封边，可制成永久片；   （3）花粉的测量：使用经过校准的目镜测微尺的Leica DMLS型光学显微镜测量自然状态下的花粉和经过乙酸酐分解法除去原生质的花粉，每种花粉分别测定30个随机样本求平均值；   （4）标准图谱的摄制：拍摄棉花和油菜花粉的标准图谱；   （5）蜜源植物判别：在400倍显微镜下观察已制好的花粉片，连续选择不少于40个不同视野，观察记录占主要比例的1‑5种花粉，总花粉数在150‑300之间较为适宜。