[发明专利]猪小肠抗菌肽PR-39在毕赤酵母中的高效生产方法及应用无效
申请号: | 201110158765.4 | 申请日: | 2011-06-14 |
公开(公告)号: | CN102229934A | 公开(公告)日: | 2011-11-02 |
发明(设计)人: | 黄毓茂;何俊;刘德辉 | 申请(专利权)人: | 华南农业大学 |
主分类号: | C12N15/12 | 分类号: | C12N15/12;C12N15/81;C07K14/47;A61K38/17;A61P31/04 |
代理公司: | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人: | 林丽明 |
地址: | 510642 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | 本发明公开了一种猪小肠抗菌肽PR-39在毕赤酵母中的高效生产方法及应用。本发明根据毕赤酵母的偏嗜性合成编码PR-39的DNA序列,连接表达载体pGAPZαA,构建pGAPZαA-PR-39真核表达载体;转化重组表达载体至宿主细胞,构建表达工程菌;发酵培养重组酵母菌,进行表达。本发明应用基因工程技术在毕赤酵母宿主细胞中高效表达了抗菌肽PR-39,表达效率高,分离纯化简单,生产成本低,易放大,稳定性好,适于大规模工业化生产,在制备抗菌药物、饲料添加剂或食品防腐剂方面具有广阔的应用前景。 | ||
搜索关键词: | 小肠 抗菌 pr 39 酵母 中的 高效 生产 方法 应用 | ||
【主权项】:
一种猪小肠抗菌肽PR‑39在毕赤酵母中的高效生产方法,其特征在于包括以下步骤:(1)根据GenBank [GI:242304] 上发表的抗菌肽PR39 氨基酸序列,选用毕赤酵母偏嗜性密码子,设计4条互为模板的引物,PCR合成编码PR‑39的DNA序列,连接表达载体pGAPZα‑A,构建pGAPZα‑A‑PR‑39真核表达载体;所述引物P1、p2、P3和P4分别具有SEQ ID No. 1、SEQ ID No. 2、SEQ ID No. 3和SEQ ID No. 4所示的核苷酸序列;(2)重组表达载体pGAPZα‑A‑PR‑39转化宿主细胞毕赤酵母,构建表达工程菌;(3)发酵培养重组酵母菌,进行表达,得表达产物;(4)将步骤(3)所述表达产物离心处理得到纯化的猪小肠抗菌肽PR‑39。
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