[发明专利]一种带谷胱甘肽配体的亲和层析多孔介质的制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种带谷胱甘肽配体的亲和层析多孔介质的制备方法和应用。以配体谷胱甘肽为自由基转移剂，巧妙地合成带谷胱甘肽配体的亲和层析多孔介质，基体的制备、介质的加工赋形和配体的担载一步反应完成。采用价廉的基体材料，大幅降低了成本。所述的亲和层析多孔介质材料为开孔结构，孔径约100～200μm，配体谷胱甘肽的键合量可达75.3mg/g，键合效率高且纯度高，结果表明所述的亲和层析多孔介质具有很好的蛋白分离能力，谷胱甘肽-s-转移酶(GST)结合效率达1.5mg/g。用所制备的带谷胱甘肽配体的亲和层析多孔介质装填层析柱，可用于谷胱甘肽-s-转移酶或以谷胱甘肽-s-转移酶为标签的融合蛋白的分离纯化。

主权项

1.一种带谷胱甘肽配体的亲和层析多孔介质的制备方法，其特征在于步骤和条件如下：(1)配制谷胱甘肽的水溶液：称取谷胱甘肽，溶解在蒸馏水中，谷胱甘肽浓度为1％～2.5％(w/v)，加入谷胱甘肽摩尔量1.2-2倍的二硫苏糖醇(DTT)，机械搅拌反应1-2h；(2)配制双键修饰葡聚糖的乳液：称取双键修饰葡聚糖加入上述(1)制备的谷胱甘肽的水溶液中，谷胱甘肽的水溶液体积与双键修饰葡聚糖质量的比例为100mL∶20-30g，加入乳化剂，乳化剂质量与水相溶液体积比例为10-15g∶100mL，机械搅拌20min；使用的乳化剂是Triton X-405、吐温80、吐温40或Pluronic F-68；(3)配制偶氮二异丁腈(AIBN)的甲苯溶液，浓度为1-2％(w/v)；(4)油水乳液配制：搅拌下向双键修饰葡聚糖的乳液中滴加AIBN甲苯溶液，AIBN甲苯溶液总体积是双键修饰葡聚糖溶液体积的3至5倍，滴加完成后继续搅拌5min；(5)聚合固化：将上述反应混合物倒入模具内腔中，置于60-80℃烘箱中固化12-36h成型；所述的模具内腔的形状为圆柱体；(6)洗涤纯制：从模具中取出块状材料，先在25℃摇床中用二甲基亚砜(DMSO)振荡抽提甲苯，后用索氏提取器对水提取，除去有机溶剂及其他杂质，冷冻干燥，获得亲和层析多孔介质；所述的双键修饰的葡聚糖具有下列结构：其中，母体葡聚糖的数均分子量为4-50万，每100个糖环上双键的个数为20-30个。