[发明专利]五味消毒饮加味提取物对小鼠角叉菜胶炎症的研究方法

摘要

本发明公开了五味消毒饮加味提取物对小鼠角叉菜胶炎症的研究方法，以五味消毒饮基础，并加味葛根与丹参两种中药,采用水提醇沉的方法，提取分离五味消毒饮加味粗提取物，采取经典的角叉菜胶诱导小鼠足肿胀模型模型，观察本提取物抗炎症作用效果，并测定其对小鼠血清肿瘤坏死因子-α和白介素-6的影响。本发明的五味消毒饮加味提取物对小鼠角叉菜胶炎症的研究方法，得出五味消毒饮加味提取物对小鼠血清中肿瘤坏死因子-α和白介素-6的水平均有抑制作用，说明其可能是通过抑制炎症细胞因子的分泌来达到抗炎症的效果，为其应用于非细菌性炎症疾病提供实验依据。

主权项

1.  五味消毒饮加味提取物对小鼠角叉菜胶炎症的研究方法，其特征在于，具体步骤为：            步骤1）准备材料    金银花、紫花地丁、蒲公英、蒲公英、野菊花、葛根、丹参；清洁级KM种小鼠；角叉菜胶、阿司匹林泡腾片、肿瘤坏死因子-α、白介素-6和 ELISA试剂盒；    步骤2）五味消毒饮加味提取物的安全限度试验以由金银花、紫花地丁、蒲公英、蒲公英、野菊花组成的五味消毒饮为基础，加葛根与丹参两种中药,采用水提醇沉的方法，提取分离出五味消毒饮加味提取物，对五味消毒饮加味提取物的浸膏进行安全限度试验：取若干偶数只清洁级KM种小鼠，雌雄各半，分为相同只数2组，阴性对照组1组，待试药物1组，禁食8小时后，以动物能耐受的最大浓度，最大体积的药量，24h内，分2次灌胃给药，每次0.4 ml/10g体重(折合生药量为450（生药）/kg)，阴性对照用等剂量生理盐水灌胃，连续观察7天，每天固定时刻观察动物的死亡情况；    步骤3）小鼠分组及给药取若干偶数只清洁级KM种小鼠，雌雄各半，分为相同只数的6组，即生理盐水组、模型对照组、阿司匹林阳性对照组（5g/kg），五味消毒饮加味提取物小剂量组（10g（生药）/kg）、中剂量组（20g（生药）/kg）、大剂量（40g（生药）/kg）3个给药组；每日固定时间按0.2ml/10g体积灌胃给药，每天1次，连续7天；末次给药前标记并测定右后足周长，取两次测量的平均值为准；末次给药30分钟后，于小鼠右后足踝部注射20μL/只0.5%的角叉菜胶致炎，于致炎后30min,90min,120min,180min分别测定足周长，生理盐水组同法注射生理盐水（20μL/只），测定结束后，眼眶取血，滴少量制作血涂片，其余全血于4^oC 5000转/分离心5分钟，分离血清，-20^oC保存以备测定；步骤4）肿瘤坏死因子-α和白介素-6水平测定 取血清样品，按照肿瘤坏死因子-α和白介素-6试剂盒说明书，用ELISA法测定小鼠血清中肿瘤坏死因子-α和白介素-6的水平；步骤5） 统计学处理 数据均以均数±标准差（+s）表示,用SPSS 10.0软件进行统计分析,统计方法采用单因素方差分析,组间均数比较采用F检验, P < 0.05表明组间差异有统计学意义。