[发明专利]飞秒激光诱变吸水链霉菌子囊亚种选育子囊霉素高产菌株方法及培养基制备

摘要

本发明公开了一种飞秒激光诱变吸水链霉菌子囊亚种选育子囊霉素高产菌株方法及培养基制备；在室温下，取吸水链霉菌子囊亚种(ATCC14891)的成熟斜面孢子用无菌水制成106-107个/ml的单孢子悬浮液；采用中心波长800nm、脉宽150fs、频率76MHz的钛宝石飞秒激光在照射功率10-30mW下，对该孢子液辐照1-10min；孢子液经适当稀释，涂布于固体平板培养，后经摇瓶筛选，从中获得高产子囊霉素突变株。本发明的优点在于采用的飞秒激光诱变方法易行、操作安全，其诱变效果远较传统的物理化学诱变方法好，在微生物制药菌种选育中有较大的推广价值，本发明通过利用飞秒激光辐照进行诱变，可选育出高产子囊霉素的突变株。突变株正突变率5-30％，发酵单位比原始菌株提高10-60％。

主权项

一种飞秒激光诱变吸水链霉菌子囊亚种选育子囊霉素高产菌株方法，其特征在于包括以下过程：将吸水链霉菌子囊亚种在室温下，取成熟孢子斜面加入适量无菌水，制成106‑107个/ml的单孢子悬浮液，将0.2ml的悬浮液分装于无菌的1.5ml的离心管内，采用中心波长800nm、脉宽150fs、频率76MHz的钛宝石飞秒激光在照射功率10‑30mW下，对该孢子辐照1‑10min，然后把经辐照处理的孢子悬液梯度稀释103‑104倍，取稀释后的孢子液0.1ml涂布于固体平板培养基中28℃培养10d，选取生长良好的单菌株接种于斜面培养基28℃培养10d，接适量孢子悬浮液于装有40ml种子培养基的250ml摇瓶中，28℃、200rpm摇床中培养48h，后接种于装有40ml发酵培养基的250ml摇瓶中，26℃‑30℃、180‑220rpm摇床中培养144‑192h，从中获得诱变的遗传稳定、发酵单位提高的吸水链霉菌子囊亚种的突变株。