[发明专利]一种黄檗转基因体系建立的方法

摘要

一种黄檗转基因体系建立的方法，它涉及一种转基因体系建立的方法。方法：一、成熟种子预处理；二、载体pCAMBIA1303利用电转方法转到根癌农杆菌EHA105中，获得含GUS基因的工程菌，然后制备侵染液，侵染后脱菌；三、获得抗性芽；四、抗性芽伸长及生根并移栽，获得黄檗转基因再生植株，即完成。本发明黄檗转基因体系建立的方法，可实现转基因黄檗的快速培育，为黄檗优良品种的开发奠定基础，从而培育出速生、丰产、优质、抗逆的黄檗新品种，所得黄檗转基因再生植株移栽成活率达94％，产生的后代遗传稳定性好，可极大地缩短林木育种周期，加速育种进程，对营造优质人工林，缓解木材供需矛盾，保护生态环境具有重要意义。

主权项

一种黄檗转基因体系建立的方法，其特征在于黄檗转基因体系建立的方法按以下步骤实现：一、将黄檗去皮后的成熟种子在超净工作台内用体积浓度为70％的酒精浸泡30s～1min，灭菌水冲洗2～3遍，然后转入质量浓度为1％的NaClO溶液中消毒10～20min，灭菌水冲洗3～5遍，再接种到含4mg/L苯基噻二唑脲、0.2mg/L萘乙酸、30g/L蔗糖和5.5g/L琼脂的MS培养基上培养1～3天；二、将含GUS基因的载体pCAMBIA1303利用电转方法转到根癌农杆菌EHA105中，获得含GUS基因的工程菌，然后接种到LB培养基上培养至菌液的OD600值为0.5～1.0，再稀释至菌液的OD600值为0.1，以5000r/min的转速离心5min，弃上清后加入等体积的含4mg/L苯基噻二唑脲、0.2mg/L萘乙酸和30g/L蔗糖的MS培养基并混匀，获得侵染液，然后倒入培养皿中，再放入步骤一中培养后的种子，将种子末端的子叶先切去，然后沿着胚轴纵切成两半，侵染30min后取出种子接种到含4mg/L苯基噻二唑脲、0.2mg/L萘乙酸、30g/L蔗糖和5.5g/L琼脂的MS培养基上培养1～3天，然后剥离胚乳并用灭菌水冲洗带子叶的下胚轴3～5遍，再放入含200mg/L头孢霉素的灭菌水中进行脱菌；三、脱菌后的种子接种到含10mg/L卡那霉素、200mg/L头孢霉素、1mg/L苯基噻二唑脲、0.2mg/L萘乙酸、30g/L蔗糖和5.5g/L琼脂的MS培养基中培养1个月，获得抗性芽；四、将抗性芽接种到含0.5mg/L 6‑苄氨基嘌呤、0.2mg/L萘乙酸、30g/L蔗糖和5.5g/L琼脂的1/2MS培养基中培养至抗性芽高于3cm，然后转接于含1mg/L乙哚丁酸、30g/L蔗糖和5.5g/L琼脂的1/2MS培养基中进行生根培养，再挑选根系发达的植株移栽到栽培基质中，浇透水并覆盖塑料膜，在21℃培养室中培养6周后去掉覆盖的塑料膜，获得黄檗转基因再生植株，即完成黄檗转基因体系建立。