[发明专利]IgY－McAb夹心ELISA检测旋毛虫循环抗原的方法

摘要

本发明公开了一种IgY－McAb夹心ELISA检测旋毛虫循环抗原的方法，它是以抗旋毛虫肌幼虫ES抗原鸡卵黄抗体IgY作为捕获抗体，以抗旋毛虫ES抗原McAb作为检测抗体；所述IgY的制备方法为：将旋毛虫肌幼虫加入培养基中无菌培养，上清纯化透析后浓缩干燥即得ES抗原，测定蛋白浓度后用其免疫罗曼蛋鸡，所产鸡蛋卵黄用饱和硫酸铵沉淀法收集IgY，纯化后测定浓度即可分装备用；所述McAb的制备方法为：建立分泌抗旋毛虫肌幼虫ES抗原的杂交瘤细胞株，使用有限稀释法进行克隆化，应用辛酸-硫酸铵法纯化McAb，测定浓度后分装备用。本发明的优点在于为感染动物血清中旋毛虫CAg的早期检测提供了一种具有高度敏感性和特异性且具有广泛应用前景的新方法。

主权项

一种IgY－McAb夹心ELISA检测旋毛虫循环抗原的方法，其特征在于：它是以抗旋毛虫肌幼虫ES抗原鸡卵黄抗体IgY作为捕获抗体，以抗旋毛虫ES抗原McAb作为检测抗体；所述旋毛虫肌幼虫ES抗原鸡卵黄抗体IgY和抗旋毛虫ES抗原McAb分别通过下述方法制备而成：（A）制备抗旋毛虫肌幼虫ES抗原鸡卵黄抗体IgY：将旋毛虫肌幼虫加入培养基中无菌培养，上清纯化透析后浓缩干燥即得ES抗原，测定蛋白浓度后分装待用；用上述旋毛虫肌幼虫ES抗原免疫罗曼蛋鸡，所产鸡蛋卵黄用饱和硫酸铵沉淀法收集IgY，纯化后测定浓度，即得抗旋毛虫肌幼虫ES抗原鸡卵黄抗体IgY，分装后备用；（B）制备抗旋毛虫ES抗原McAb：建立分泌抗旋毛虫肌幼虫ES抗原的杂交瘤细胞株，使用有限稀释法进行克隆化，应用辛酸‑硫酸铵法纯化McAb，测定浓度后分装备用。