[发明专利]SmHMGR和SmDXR双基因共转化提高丹参毛状根中丹参酮含量的方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，是一种提高丹参酮含量的方法，用丹参3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因SmHMGR和1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原酶基因SmDXR构建成重组载体，遗传转化丹参叶片获得转SmHMGR和SmDXR基因的丹参毛状根。本发明获得的转基因丹参毛状根中丹参酮含量显著提高，共转SmHMGR和SmDXR双基因的一个株系(HD34)的总丹参酮含量为对照的5.30倍。本发明提供了一种提高丹参毛状根中丹参酮含量的方法，也为生产具重要临床需求的丹参酮提供了一种新型优质药源，对缓解丹参酮药源的紧缺性起到积极的促进作用。

主权项

SmHMGR和SmDXR双基因共转化提高丹参毛状根中丹参酮含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将丹参3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶基因SmHMGR和1‑脱氧‑D‑木酮糖‑5‑磷酸还原酶基因SmDXR插入植物表达载体，构建重组载体；所述的丹参3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶基因和1‑脱氧‑D‑木酮糖‑5‑磷酸还原酶基因序列分别为SEQ ID：1和SEQ ID：2的DNA序列；(2)将步骤(1)所获得的重组载体转入发根农杆菌，构建含有重组载体的发根农杆菌；(3)用步骤(2)所得含有重组载体的发根农杆菌介导丹参3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶基因和1‑脱氧‑D‑木酮糖‑5‑磷酸还原酶基因转化丹参，获取毛状根；(4)检测步骤(3)毛状根中的丹参3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶基因和1‑脱氧‑D‑木酮糖‑5‑磷酸还原酶基因，取筛选结果为阳性的转基因毛状根。