[发明专利]一种甘蔗宿根矮化病菌巢式PCR快速检测方法无效
| 申请号： | 201110172722.1 | 申请日： | 2011-06-24 |
| 公开（公告）号： | CN102230018A | 公开（公告）日： | 2011-11-02 |
| 发明（设计）人： | 沈万宽;刘睿;杨湛端;邓海华;陈健文;陈仲华 | 申请（专利权）人： | 广州甘蔗糖业研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 谭英强 |
| 地址： | 510316 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种甘蔗宿根矮化病菌巢式PCR快速检测方法。通过提取样品DNA，设计引物进行巢式PCR，可以快速、准确的鉴定甘蔗宿根矮化病菌的存在与否。本发明检测灵敏度为100fg病菌基因组DNA，较同一引物常规PCR灵敏度提高100-1000倍。本发明适用于甘蔗引种检疫、脱毒（菌）种苗生产及蔗区甘蔗宿根矮化病普查等。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 甘蔗 宿根 矮化 病菌 pcr 快速 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种甘蔗宿根矮化病菌巢式PCR快速检测方法，包括如下步骤：1) 提取待检样品的全DNA；2) 以得到的全DNA为模板，以ITS1：5’– AGTCGTAACAAGGTAGCCGT ‑3’ （SEQ ID NO.1）和ITS2：5’– GTGCCAAGGCATCCACC ‑3’ （SEQ ID NO.2）为引物，进行首轮PCR，得到首轮PCR产物；3) 以上述PCR产物为模板，以RL2：5’ –GAGACAGTACTTATCACTTCGG‑3’ （SEQ ID NO.3）和RR2：5’– CGACGCAGATTGACCAATGATC ‑3’ （SEQ ID NO.4）为引物，进行二轮PCR；4) 对二轮PCR产物进行电泳，根据371 bp目的片断的有无，判断样品为阳性或者阴性。
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