[发明专利]一种快速检测样品中金黄色葡萄球菌的试剂盒及检测方法

摘要

一种快速检测样品中金黄色葡萄球菌的试剂盒及检测方法，属于免疫学检测技术领域。本发明利用甲醛灭活的金黄色葡萄球菌免疫原免疫健康的新西兰大白兔得到多克隆抗体作为包被抗体，免疫BALB/C小鼠并进行细胞融合得到单克隆抗体作为二抗，建立了食品（牛奶）中金黄色葡萄球菌的双抗夹心酶联免疫法的试剂盒，为金黄色葡萄球菌在食品中的残留检测提供了快速高效的检测手段，费用较低并且稳定性和重复性较好。检测限为105cfu/mL，适合样品的大批量检测。

主权项

一种金黄色葡萄球菌的双抗夹心酶联免疫检测试剂盒，其特征在于利用甲醛灭活的金黄色葡萄球菌免疫原免疫健康的新西兰大白兔得到多克隆抗体作为包被抗体，免疫BALB/C小鼠并进行细胞融合得到单克隆抗体作为二抗，建立了金黄色葡萄球菌的双抗夹心酶联免疫法的试剂盒；所述试剂盒由以下几部分组成：（1）以0.05M的碳酸盐缓冲溶液稀释的多克隆抗体，包被96孔酶标板中，每孔100μL；4℃孵育过夜，按照常规ELISA方法封闭洗涤，为试剂盒中的反应板；（2）金黄色葡萄球菌阳性对照标准品；阴性对照标准品；金黄色葡萄球菌ATCC 29213接种在Baird‑Parker平板上，37℃培养24h，挑取单菌落于10% 氯化钠胰酪胨大豆肉汤37℃、200r/min振荡培养17h，计数，用1%甲醛4℃过夜灭活，生理盐水调整ATCC 29213浓度至5×109cfu/mL，为免疫原；用PBS缓冲液调整ATCC 29213浓度为107cfu/mL为阳性对照标准品，PBS缓冲液为阴性对照标准品；（3）以抗体稀释液稀释的单克隆抗体抗血清；抗体稀释液：含0.1%明胶的PBST溶液；（4）以抗体稀释液稀释辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG‑HRP；（5）显色液A：0.933 g柠檬酸，3.68 g Na2HPO4·12H2O，18 μL 30%H2O2，用超纯水定容至100 mL；显色液B：60 mg 3,3/,5,5/‑四甲基联苯胺溶于100 mL乙二醇中；使用前将A与B以5:1体积混合；（6）终止液：2M 硫酸溶液。