[发明专利]针对狂犬病病毒核蛋白保守线性表位肽的单抗的制备方法

摘要

本发明一种针对狂犬病病毒核蛋白保守线性表位肽的单抗的制备方法，属于免疫球蛋白技术领域。所述方法包括：制备免疫原、用免疫原对Balb/c小鼠进行注射免疫和杂交瘤细胞株的筛选步骤。本发明具有首次采用多血清型狂犬病病毒核蛋白保守线性表位肽作为免疫原制备特异性单克隆抗体，所得的单抗不仅可以经过FITC标记用于FAT，也可以经过HRP标记应用于直接快速免疫组化法以及双抗夹心ELISA法检测组织标本内的狂犬病病毒；同时本发明的方法不需要特殊的设备，在现有狂犬病流行较严重的国家的现有条件下的普通实验室水平均可进行操作的优点。

主权项

一种针对狂犬病病毒核蛋白保守线性表位肽的单抗的制备方法，包括下述步骤：(1)、多肽的制备：在狂犬病病毒核蛋白第152到164位氨基酸区段的N端加C，得到多肽CKISGQNTGNYKTN；(2)、免疫原的制备：将多肽与已活化的KLH进行耦联，得到免疫原；(3)、初次免疫：取免疫原与弗氏完全佐剂充分乳化，对Balb/c小鼠腹部多点皮下注射免疫；(4)、第一次强化免疫：初次免疫3周后，取免疫原与弗氏不完全佐剂充分乳化，对Balb/c小鼠腹部多点皮下注射免疫；(5)、第二次强化免疫：初次免疫5周后，取免疫原与弗氏不完全佐剂充分乳化，对Balb/c小鼠腹部多点皮下注射免疫；(6)、杂交瘤细胞株的筛选：取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合，对融合后细胞采用间接ELISA和IFA双重筛选，选择阳性的克隆进行亚克隆，得到产生所述针对狂犬病病毒核蛋白保守线性表位肽的单抗的杂交瘤细胞株。