[发明专利]从青花菜花椰菜提取萝卜硫苷化合物的方法

摘要

本发明公开了从青花菜花椰菜提取萝卜硫苷化合物的方法，属于植物组分提取技术领域。该方法包括：(1)青花菜花椰菜植物材料的选择与预处理；(2)提取试剂，粗提及浓缩；(3)粗提液的有机溶剂萃取及去杂；(4)萃取液的初步纯化；(5)色谱柱纯化萝卜硫苷等步骤、工艺。具有提取纯化方法简单，萝卜硫苷提取得率高，组分单一纯度高等特点，本发明产品可作为标准品应用于生物化学实验及相关研究中。

主权项

从青花菜花椰菜提取萝卜硫苷化合物的方法，其特征在于按如下步骤进行：(1)青花菜花椰菜植物材料的选择与预处理：选择含萝卜硫苷占总脂肪类芥子油苷90％以上且占总芥子油苷80％以上的青花菜花椰菜的种子、芽苗、茎叶和花器官为材料，在避免如刀割、压挤、磨损破碎性物理伤害前提下，用水清洗、沥干后，备用；(2)提取试剂，粗提及浓缩：以水、甲醇或80％甲醇水溶液为提取试剂；将提取试剂与青花菜花椰菜预处理后的植物材料，按体积重量1‑3L∶1‑2kg的比例和85‑100℃、搅拌浸泡20‑30min的相同工艺重复提取2‑3次，分别经过滤、超滤除去不溶物后合并滤液，经旋转蒸发或冷冻干燥后溶于占提取试剂1‑2％体积的水中后得萝卜硫苷粗提液；(3)粗提液的有机溶剂萃取及去杂：将萝卜硫苷粗提液用有机溶剂交互反复萃取至无色；收集水相，经过滤、超滤或离心除去不溶物，收集上清液；(4)萃取液的初步纯化：将萃取液的上清液按以下程序进行初步纯化：1)按照1‑2g树脂提取100mg萝卜硫苷的比例称取DEAE‑Sephadex A‑25阴离子交换树脂后，用80‑100％甲醇溶液浸泡10‑24h，装入柱床高于5cm的玻璃柱中；2)用3‑5倍于阴离子交换树脂体积的浓度为0‑10％甲醇水溶液进行洗柱；3)将除去不溶物后的水相部分上样；4)用两倍柱床体积的水淋洗后，再用等柱床体积的20％异丙醇或20％乙腈溶液为淋洗液进行淋洗；5)用2‑3倍柱床体积的并与上述淋洗液相配套的阴离子交换液进行洗脱，并收集到与阴离子交换液等体积的无水乙醇中；6)洗脱液经旋转蒸发干燥后溶于水，经0.22μm水相滤膜超滤后得到含有多种芥子油苷组分的混合液；(5)色谱柱纯化萝卜硫苷：以制备型或半制备型色谱柱为纯化柱，将初步纯化混合液分次进样，以含0.1％三氟乙酸的水和含0.1％三氟乙酸的乙腈为流动相，乙腈浓度按初始的0‑5％持续5min，5‑20％持续20min，20％维持5min设置梯度，在流速2‑3ml/min，检测波长210‑230nm下，收集最高色谱峰出峰期间流出的流动相；将上述分次进样、收集后的流动相合并，经冷冻干燥、旋转蒸发或氮气吹干干燥后，即获得纯度高于95％的萝卜硫苷产品；萝卜硫苷的含量参照Sun et al.，Food Chemistry，(2011)方法进行定量。