[发明专利]一种高效去除腐殖质的环境样品总DNA提取方法

摘要

本发明公开了高效去除腐殖质的环境样品总DNA提取方法，包括以下步骤：(1)取0.3g过筛的土样于装有三颗2.5mm-3.0mm灭菌玻璃珠的2mL的离心管中，加入1mL脱腐缓冲液，Vortex-Genie2(Mobio Laboratories Inc)涡旋1min，12000r/min离心2min，弃上清；(2)加入1mL 0.5mol/L的氯化钙溶液，Vortex-Genie2(MobioLaboratories Inc)涡旋2min，12000r/min离心1min，弃上清；(3)加入800μL DNA提取缓冲液，Vortex-Genie2(Mobio Laboratories Inc)涡旋5s。快速高效提取土壤总DNA，为土壤宏基因组学研究提供高纯度基因组DNA。

主权项

1.一种高效去除腐殖质的环境样品总DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取0.3g过筛的土样于装有三颗2.5mm-3.0mm灭菌玻璃珠的2mL的离心管中，加入1mL脱腐缓冲液(100mmol/L Tris，100mmol/L Na₄P₂O₇，100mmol/L Na₂EDTA，1.0％PVP，100mmol/L NaCl，0.05％Triton X-100，pH 10.0)，Vortex-Genie2(MobioLaboratories Inc)涡旋1min，12000r/min离心2min，弃上清；(2)加入1mL 0.5mol/L的氯化钙溶液，Vortex-Genie2(Mobio Laboratories Inc)涡旋2min，12000r/min离心1min，弃上清；(3)加入800μL DNA提取缓冲液(100mmol/L Tris-HCl，1.5mol/L NaCl，1％CTAB，pH 8.0)，Vortex-Genie2(Mobio Laboratories Inc)涡旋5s；(4)加入200μL SDS溶液(20％)，颠倒混匀，65℃温育10min，5min颠倒混匀一次。；(5)取上清900μL于2mL离心管中，加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)，12000r/min离心5min；(6)取上清800μL于2mL离心管中，加入等体积的氯仿∶异戊醇(24∶1)，12000r/min离心5min；(7)取上清600μL于1.5mL离心管中，加入0.6倍体积的异丙醇，冰浴20min，12000r/min离心5min；(8)弃上清，用70％的酒精洗沉淀，自然干燥或冷冻干燥；(9)50μL TE溶解沉淀。