[发明专利]白血病融合基因的TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测方法及其专用引物、探针与试剂盒

摘要

本发明公开了一种白血病融合基因的TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测方法及其专用引物、探针与试剂盒。本发明的方法是以待检样品中的白血病融合基因(AML1-ETO、BCR-ABL190、BCR-ABL210、CBFb-MYH11(A)、CBFb-MYH11(D)、CBFb-MYH11(E)、E2A-PBX1、MLL-AF4、PML-RARa(bcr1)、PML-RARa(bcr2)、PML-RARa(bcr3)、SIL-TAL1和TEL-AML1)为检测对象，准确度及精密度均较好。利用本发明试剂盒检测白血病患者8种融合基因特异性好，可达100％；灵敏度高，达到0.01％，即10000个细胞中有1个白血病细胞就能够被检测出。本发明的试剂盒对于白血病的诊断可提供直接的理论依据，并为疗效观察、预后判断、微小残留病检测等提供有力手段，而且，操作简便、稳定性好，具有深远的临床意义和推广性。本发明的检测方法及试剂盒可用于多种临床样本(骨髓、外周血或组织等)中白血病融合基因的定性检测，应用前景广阔。

主权项

用于对常见的白血病融合基因进行TaqMan‑MGB探针实时荧光PCR检测的引物和TaqMan‑MGB探针，其核苷酸序列如下：1)用于检测AML 1‑ETO基因的上游引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示，下游引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：2所示，TaqMan‑MGB探针的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：3所示；2)用于检测BCR‑ABL190和BCR‑ABL210基因的上游引物的核苷酸序列分别如序列表中SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示，下游引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：6所示，TaqMan‑MGB探针的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：7所示；3)用于检测CBFb‑MYH11(A)、CBFb‑MYH11(D)和CBFb‑MYH11(E)基因的上游引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：8所示，下游引物的核苷酸序列分别如序列表中SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：11所示，TaqMan‑MGB探针的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：12所示；4)用于检测E2A‑PBX1基因的上游引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：13所示，下游引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：14所示，TaqMan‑MGB探针的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：15所示；5)用于检测MLL‑AF4基因的上游引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：16或SEQ ID NO：17所示，下游引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：18所示，TaqMan‑MGB探针的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：19所示；6)用于检测PML‑RARa(bcr1)、PML‑RARa(bcr2)和PML‑RARa(bcr2)基因的上游引物的核苷酸序列分别如序列表中SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22所示，下游引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：23所示，TaqMan‑MGB探针的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：24所示；7)用于检测SIL‑TAL1基因的上游引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：25所示，下游引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：26所示，TaqMan‑MGB探针的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：27所示；8)用于检测TEL‑AML1基因的上游引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：28所示，下游引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：29所示，TaqMan‑MGB探针的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：30所示。