[发明专利]体外模拟评定液体饲料复合酶质量的方法

摘要

本发明公开了一种体外模拟评定液体饲料复合酶质量的方法，包括以下步骤：步骤1：配制DNS试剂：步骤2：绘制标准曲线；步骤3：胃蛋白酶液配制；步骤4：采用以下公式计算：y＝ax+b，根据吸光度(y)计算葡萄糖量(x)；步骤5：结果分析：还原糖含量高的，说明饲料复合酶的质量较好。以上方法比较科学地判断液体饲料复合酶的质量和应用效果。减少检测费用，节省试验时间。帮助饲料酶使用客户较好地评定和判断液体饲料复合酶的质量。

主权项

一种体外模拟评定液体饲料复合酶质量的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：配制DNS试剂：称取氢氧化钠100.0g加水溶解，定容至500mL(命名为A试液)。称取3，5‑二硝基水杨酸15.75g，将其缓慢加入到2500mL蒸馏水中，不断搅拌，水浴至45℃，向其中逐步加入500mL A试液，不断搅拌至溶液清澈透明(在加入氢氧化钠溶液过程中，溶液温度不要超过48℃)。再逐步加入四水酒石酸钾钠455g、苯酚12.5g、无水亚硫酸钠12.5g，继续45℃水浴加热，同时补水1500mL，不断搅拌，至上述物质完全溶解后，冷却至室温，并定容到5000mL，储存于棕色瓶中，标识名称和配制日期，避光，室温保存7天后可以使用。有效期3个月。步骤2：绘制标准曲线：吸取1mg/ml无水葡萄糖溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于试管中，补水至20ml，加DNS试剂3ml，混合后于沸水中煮10min，冷却，定容至15ml，于分光光度计540nm波长下测吸光度(A)；以吸光度为纵坐标，葡萄糖量为横坐标，绘制标准曲线，上述步骤重复三次，三次重复实验的均值用最小二乘法拟合一元线性方程y＝ax+b，求出吸光度(y)与葡萄糖量(x)的关系；步骤3：胃蛋白酶液配制：将10g胃蛋白酶加入1000ml水中，然后用3mol/L HCl调节pH值至2.5得到胃蛋白酶液备用；在三角瓶中按料液比为(g∶ml)1∶3.7加入所述胃蛋白酶液，在三个实验组的三角瓶中分别加入待评定的液体复合酶1ml，在38℃摇床中振荡，分别在1h、3h、5h每组取出一个三角瓶，用氢氧化钠溶液调节pH值至5.0以上，然后在4000转离心机中离心10min，取出上清液；吸取一定量上清液至15ml刻度管中加水补至2ml，加3mlDNS，在沸水浴中煮沸10min后取出迅速用冷水冷却；定容至15ml，于分光光度计540nm波长下测吸光度(A)；保证吸光值在0.25‑0.35之间；步骤4：采用以下公式计算：y＝ax+b，根据吸光度(y)计算葡萄糖量(x)；步骤5：结果分析：还原糖含量高的，说明饲料复合酶的质量较好。