[发明专利]一种检测土壤和沉积物中细菌数量的荧光显微计数方法

摘要

一种检测土壤和沉积物中细菌数量的荧光显微计数方法，属于环境微生物学领域。所述检测方法包括以下步骤：(1)配制样品稀释液和抗褪色剂；(2)将样品加入到样品稀释液中进行处理，制成样品计数液。取样品计数液到离心管中，加入10×的SYBR Green I荧光染料，避光染色后加入抗褪色剂，制成染色样品；(3)将洁净的盖玻片盖在干净的血球计数板计数室上，涡旋混匀染色样品，用移液器取染色样品，沿盖玻片边缘加样，使染色样品充满计数室。将加样的血球计数板静置5min，置荧光显微镜载物台上，以480nm光波激发，40倍物镜下观察，计数5个中方格中细菌颗粒的数量。最后按公式Y＝31.25×A×106计算出1g样品中细菌的数量，其中Y表示1g样品中细菌的数量，A表示一个中方格中细菌的平均数。该方法省时省力、成本低廉、抗褪色，能快速准确检测出泥土和沉积物中细菌的数量。

主权项

一种检测土壤和沉积物中细菌数量的荧光显微计数方法，其特征在于包括以下步骤：(1)缓冲液的配制：用焦磷酸钠和EDTA溶于无菌蒸馏水中，配制成样品稀释液；用对苯二胺溶于PBS‑甘油缓冲液中，配制成抗褪色剂；(2)样品前处理：称取0.1g泥样到无菌Eppendolf管中，加入1ml样品稀释液，涡旋振荡5min，制成均匀悬浊液，取0.1ml悬浊液到0.9ml样品稀释液中，涡旋振荡5min，制成样品计数液，取80μl样品计数液到200μl的离心管中，加入10μl 10×的SYBR Green I荧光染料，避光染色1min后加入10μl抗褪色剂，制成染色样品；(3)荧光显微计数：将洁净的盖玻片盖在干净的血球计数板计数室上，涡旋混匀染色样品，用移液器取20μl染色样品，沿盖玻片边缘加样，使染色样品充满计数室，将加样的血球计数板静置5min，置荧光显微镜载物台上，以480nm光波激发，40倍物镜下观察，计数5个中方格中细菌颗粒的数量，最后按公式Y＝31.25×A×106计算出1g样品中细菌的数量，其中Y表示1g样品中细菌的数量，A表示一个中方格中细菌的平均数。