[发明专利]检测豇豆胰蛋白酶抑制剂的免疫金颗粒试剂条的制备方法

摘要

本发明涉及一种检测豇豆胰蛋白酶抑制剂（CpTI）的免疫金颗粒试剂条的制备方法，包括：重新优化CpTI基因密码子，构建CpTI基因表达序列，构建CpTI基因和谷胱甘肽-S-转移酶（GST）基因融合表达载体，利用亲合层析柱纯化和切割获得CpTI蛋白，再将佐剂溶合CpTI蛋白后免疫兔和小鼠，分别获得抗CpTI多克隆抗体和单克隆抗体，采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，由抗CpTI蛋白单克隆抗体和多克隆抗体通过夹心法获得检测CpTI蛋白的免疫金颗粒试剂条。本发明的有益效果为：通过夹心法制备胶体金试剂条，使得检测的特异性大大增加；能定性检测植株中是否含有CpTI蛋白，检测最低限为10ng/ml；本试剂条操作简单，不污染环境。

主权项

一种检测豇豆胰蛋白酶抑制剂（CpTI）的免疫金颗粒试剂条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）重新优化CpTI基因密码子，构建CpTI基因表达序列；2）构建CpTI基因和谷胱甘肽‑S‑转移酶（GST）基因融合表达载体；3）在细菌表达GST‑CpTI融合蛋白后，通过亲合层析柱谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B纯化融合蛋白，切除GST, 纯化CpTI蛋白；4）将GST‑CpTI融合蛋白免疫兔，分离纯化得到兔抗CpTI多克隆抗体；5）将CpTI蛋白免疫雌性Balb/C小鼠，得到稳定分泌单克隆抗体细胞株并进行细胞培养，注射小鼠，获得单克隆抗体；6）采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金；7）通过夹心法获得检测CpTI蛋白的免疫金颗粒试剂条。