[发明专利]一种提高八氢番茄红素脱氢酶体外反应速率的方法有效
| 申请号： | 201110190940.8 | 申请日： | 2011-07-08 |
| 公开（公告）号： | CN102286593A | 公开（公告）日： | 2011-12-21 |
| 发明（设计）人： | 肖敏;张金华;卢丽丽 | 申请（专利权）人： | 山东大学 |
| 主分类号： | C12P23/00 | 分类号： | C12P23/00;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 济南金迪知识产权代理有限公司 37219 | 代理人： | 许德山 |
| 地址： | 250100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种提高水-有机两相酶促反应速率的方法，尤其涉及一种提高八氢番茄红素脱氢酶体外反应速率的方法，属于生物工程技术领域。它包括如下步骤：取破碎粗酶液，加入八氢番茄红素丙酮溶液、葡萄糖、葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶，超声波混匀，28℃～30℃避光密闭振荡反应，然后加甲醇，55℃～60℃温浴15～20分钟，加入沸程30℃～60℃的石油醚振荡萃取反应产物，收集上层石油醚层，经真空旋转蒸发，得产物。本发明利用超声波的均质、分散和乳化等力学效应，对八氢番茄红素脱氢酶体外反应体系进行优化，增大了底物和酶接触的机会，显著提高了酶促反应速率，缩短了反应时间，减少产物的氧化损失，提高了数据的准确度。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 番茄 脱氢酶 体外 反应 速率 方法 | ||
【主权项】：
一种提高番茄红素脱氢酶体外反应速率的方法，包括如下步骤：(1)取400μL破碎粗酶液，加入八氢番茄红素丙酮溶液、葡萄糖、葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶，使终浓度分别为2～20μmol/L、2mmol/L、20U/mL和20000U/ml，反应体系用缓冲液定容至500μL，得反应液；(2)将步骤(1)制得的反应液，在20～23kHz、50～150W超声波混匀10～60秒，28℃～30℃避光密闭振荡反应1～5小时，得反应后溶液；(3)向步骤(2)制得的反应后溶液中加2.5～3mL甲醇，55℃～60℃温浴15～20分钟，终止反应，加入沸程30℃～60℃的石油醚200～500μL，振荡萃取反应产物，收集上层石油醚层，经真空旋转蒸发，得产物。
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