[发明专利]一种产蛋白酶的寡营养细菌分离筛选方法

摘要

本发明涉及一种产蛋白酶的寡营养细菌分离筛选方法，该方法分离的样品采自新疆古尔班通古特沙漠贫瘠土壤环境，采用低营养配方，分离纯化出的36株菌均具寡营养性。通过采用明胶液化法初筛和以酪蛋白为底物复筛，从中筛选出一株产蛋白酶能力强的菌株，菌体杆状、菌落圆形。该方法选择性强，效率高，所获得的菌株营养需求低，产酶能力强，耐高温，应用于酶制剂生产将可降低成本。将可能成为一种具有重大应用前景的蛋白酶产生菌。

主权项

一种产蛋白酶的寡营养细菌分离筛选方法，其特征在于按下列步骤进行：a、采样：取新疆古尔班通古特沙漠0‑5cm处土壤样品装入采样袋备用；b、菌株的分离：采用平板稀释分离法，将样品涂布于无机氮培养平板，温度37℃培养48小时，获得单个菌落后，再通过划线法纯化获取纯菌株，其中无机氮培养基为(NH4)2SO4 0.5，KH2PO4 1g，MgSO40.2g，NaCl 5g，CaCO3 5g，葡萄糖用量为每升培养基中含碳量为15mg，琼脂粉11g，蒸馏水1000ml，pH 7.0‑7.2；c、初筛：将步骤b分离获得的纯菌株通过穿刺的方式接种于明胶培养基上，温度37℃培养48小时，选取液化明胶能力强的菌株，其中明胶培养基为：牛肉膏3g，蛋白胨5g，明胶120g，蒸馏水1000ml，pH7.0‑7.2；d、复筛：将步骤c初筛获得的菌株，接种于豆饼粉液体培养基中，培养基装液量35mL/250mL三角瓶，温度37℃摇瓶振荡培养48小时，摇瓶转速200r/min，以酪蛋白为底物测酶活后筛选酶活力高的菌株即可，其中豆饼粉培养基为玉米粉20g，豆饼粉15g，麸皮20g，Na2HPO4 0.3g，NaH2PO4 0.2g，MgSO4 0.2g，CaCl2 0.2g，蒸馏水1000ml，pH 7‑7.2。