[发明专利]一种中山杉品种302的组织培养繁殖方法

摘要

本发明公开了一种中山杉品种302的组织培养的繁殖方法，该方法包括以下步骤：(1)选取外植体并进行消毒；(2)将原WPM培养基进行改良；(3)将处理后的外植体切割后，进行茎段初代诱导培养；(4)将步骤(3)中所得新梢进行继代增殖培养；(5)将步骤(4)中所得无根试管苗进行生根诱导培养；(6)对步骤(5)中得到的无菌苗进行驯化炼苗培养。采用该繁殖方法对中山杉302进行育苗，增殖率为102-110倍，且育苗时间短。

主权项

一种中山杉302组织培养的繁殖方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)外植体的选取与消毒：选取当年生顶稍作为外植体，采样时间为当枝条由绿完全转红后第15天至第35天，自来水冲洗干净后，进行消毒；(2)改良WPM培养基的制备：用Ca(NO3)2.4H2O 684mg/L和KNO3380mg/L代替原WPM培养基中的K2SO4和CaCl2.2H2O；(3)不定芽的诱导：取步骤(1)中处理得到的外植体，切割为0.5‑1.0cm长的茎段，接种于诱导培养基中进行不定芽的诱导，培养温度为20‑26℃，首先在黑暗中培养20‑26小时，然后进行正常培养20‑25天；所述正常培养条件为：光照时间为10‑16小时/天，光照强度为1600‑2000lx；(4)继代增殖：将步骤(3)中得到的不定芽分化出的枝条接入继代增殖培养基，进行继代培养25‑35天，培养温度为20‑26℃，光照时间为10‑16小时/天，光照强度为1600‑2000lx；(5)根的诱导：将步骤(4)中所得中山杉无根试管苗进行切割后，接入生根培养基中进行生根培养15‑20天，培养温度为20‑26℃，光照时间为10‑16小时/天，光照强度为1600‑2000Lx；(6)无菌苗的驯化炼苗：将步骤(4)所得中山杉带根无菌苗的培养瓶瓶盖打开，露天培养2‑3天，然后移入采用多菌灵(稀释浓度2g/L)消毒的基质中，组培苗上方使用带孔PVC膜覆盖保湿，驯化容器采用50孔穴盘，放在通风阴凉处培养25‑30天，培养到第15天将PVC膜移除，换用折光率75％的遮阳网；所述基质成分为体积比1∶1的泥炭土与珍珠岩；上述诱导培养基、继代增殖培养基、生根培养基中均含有琼脂6.0‑7.0g/L、蔗糖25‑35g/L，且pH值为5.8‑6.2。