[发明专利]采用反转录环介导等温扩增技术检测烟草病毒的方法

摘要

本发明涉及采用反转录环介导等温扩增技术检测烟草病毒的方法，其中该方法包括烟草病毒总RNA提取，RT-LAMP反应和电泳检测，确定病毒种类，其中烟草病毒选自黄瓜花叶病毒(CMV)、马铃薯Y病毒(PVY)、烟草蚀纹病毒(TEV)、烟草花叶病毒(TMV)和烟草脉带花叶病毒(TVBMV)中的2种或2种以上。本发明根据烟草病毒的外壳蛋白基因保守区设计了LAMP引物，采用一步法反转录环介导等温扩增技术建立了一种快速、灵敏、高度特异的检测烟草多种主要病毒的方法。为烟草病毒的快速检测提供了新的手段。

主权项

一种采用反转录环介导等温扩增技术检测多种烟草病毒的方法，其中该方法包括烟草病毒总RNA提取，RT LAMP反应和电泳检测，确定病毒种类，其中烟草病毒选自黄瓜花叶病毒(CMV)、马铃薯Y病毒(PVY)、烟草蚀纹病毒(TEV)、烟草花叶病毒(TMV)和烟草脉带花叶病毒(TVBMV)中的2种或2种以上，其中RT LAMP反应采用的引物是包含如下5组引物中的2组或2组以上引物的引物组：第1组引物，用于CMV病毒的RT LAMP反应：外引物(F3和B3)：SEQ ID NO.1：5’ TCTACCGTGTGGGTGACA 3’；SEQ ID NO.2：5’ GAGCACGGCGTACTTTCG 3’；内引物(FIP和BIP)：SEQ ID NO.3：5’ CCGTCCGCGAACATAGCAGAG GTCCGTAAAGTTCCTGCCTC 3’；SEQ ID NO.4：5’ GCTGCATCTGGAGTCCAAGCC TGTCGCCAATATCAGCGC 3’；第2组引物，用于PVY病毒的RT LAMP反应：外引物(F3和B3)：SEQ ID NO.5：5’ CGCGCTATGCCTTTGACTT 3’；SEQ ID NO.6：5’ TTGGAGAGACATCCTCGGT 3’；内引物(FIP和BIP)：SEQ ID NO.7：5’ CAATGCTGCGGCCTTCATTTGA GGTCACATCACGAACACCAG 3’；SEQ ID NO.8：5’ TCAGCCCAACCTCGACTTTTCG GCCTCTCTGTGTTCTCCTCT 3’；第3组引物，用于TEV病毒的RT LAMP反应：外引物(F3和B3)：SEQ ID NO.9：5’ AAAACGCGCAGCCAACAT 3’；SEQ ID NO.10：5’ CGTACTGCAGCAGCTTTCA 3’；内引物(FIP和BIP)：SEQ ID NO.11：5’ GGCATGTATGGTCGTTCCCTGT GACACACTTCAGTGACCTGG 3’；SEQ ID NO.12：5’ TTGTCACGCTATGCGTTCGACT TTGCATATGCGCCTCCCT 3’；第4组引物，用于TMV病毒的RT LAMP反应：外引物(F3和B3)：SEQ ID NO.13：5’ GGAAACCTTCACCACAAGT 3’；SEQ ID NO.14：5’ TATAGCGCTCCTTATGGC 3’；内引物(FIP和BIP)：SEQ ID NO.15：5’ GCTGTGACTAACGGATCTAATACCG AGGTTCCCTGACAGTGAC 3’；SEQ ID NO.16：5’ GAAGTTGAAAATCAGGCGAACCC TGCGTCGTCTACTCTACG 3’；第5组引物，用于TVBMV病毒的RT LAMP反应：外引物(F3和B3)：SEQ ID NO.17：5’ AACGGAATGTGGGTCATG 3’；SEQ ID NO.18：5’ TGTCATGTCAGTCAAATTGC 3’；内引物(FIP和BIP)：SEQ ID NO.19：5’ TGTTGGTTTGGCATGTTCCA GATGGTGATGAACAGGTTG 3’；SEQ ID NO.20：5’ TAGACAAATCATGGCACACTTTAGC GGCATATACGGTTTCTCTGC 3’。