[发明专利]一种批量基因克隆的方法

摘要

本发明公开了一种批量基因克隆的方法。此方法包括以下步骤：将具有多个目标性状差异的两个亲本杂交构建分离群体；分离群体中随机选择的基因克隆群体与2个亲本一起基因组高通量测序，比对2个亲本基因组，获得亲本间差异等位位点。按不同目标性状，将克隆群体的测序数据归入不同的显性池与对应的隐性池，按完全匹配的方式，比对亲本间差异等位位点序列在显性池与隐性池间的匹配情况，并计算分离比。通过统计检验，获得目标性状的候选位点。然后确定目标基因座位。通过PCR扩增克隆全长目标基因，通过遗传互补实验验证目标基因功能。本发明对同一次实验获得的测序数据进行不同的分组，即可实现克隆多个基因的目的，实现了数据的充分发掘与利用。

主权项

一种批量基因克隆的方法，其特征在于，包括以下步骤：选用在多个目标性状上有差异的材料做亲本，将两个亲本杂交构建分离群体，从分离群体中随机选择100个以上的基因型作为基因克隆群体，提取克隆群体中每个个体与两个亲本基因组一起高通量测序，并进行基因组初步直接组装；对两个亲本基因组进行比对，获得亲本间差异等位位点；按不同目标性状，将克隆群体的测序数据归入不同的显性池与对应的隐性池，按完全匹配的方式，比对亲本间差异等位位点序列在显性池与隐性池间的匹配情况，并计算分离比；通过统计检验，获得显性池与隐性池中分离比分别为3∶1和0∶1的等位位点，即获得目标性状的候选位点；扩大隐性池群体，PCR逐个检查隐性池中每个个体的每个候选位点或隐性池候选位点富集后重测序，在隐性池中完全没有出现的显性亲本位点即为目标基因座位；通过PCR扩增克隆全长目标基因，通过遗传互补实验验证目标基因功能。