[发明专利]一种抑制移植器官慢性排斥反应的抗体的制备及纯化方法在审
| 申请号： | 201110223524.3 | 申请日： | 2011-08-05 |
| 公开（公告）号： | CN102911270A | 公开（公告）日： | 2013-02-06 |
| 发明（设计）人： | 曹利平;丁国平 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;C07K1/20 |
| 代理公司： | 杭州裕阳专利事务所(普通合伙) 33221 | 代理人： | 冉国政 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种抑制移植器官慢性排斥反应的抗体的制备及纯化方法，包括以下步骤：步骤一，用淋巴细胞分离液收集外周血单核细胞，20ng/mlrMICA诱导培养；步骤二，用细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒提取单个核细胞蛋白质；步骤三，串联高效液相层析（HPLC）纯化抗MICA抗体；步骤四，抗MICA抗体的鉴定：利用rMICA，用WesternBlot进行反向验证。利用本发明的方法所得到的抗MICA抗体，能够通过封闭内源性MICA蛋白、MICA siRNA抑制内源性MICA基因表达，从而达到阻断移植器官MICA表达的效果，即在器官移植术后有效降低供体器官中MICA基因及其蛋白的表达。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 抑制 移植 器官 慢性 排斥 反应 抗体 制备 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种抑制移植器官慢性排斥反应的抗体的制备及纯化方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一：用淋巴细胞分离液收集外周血单核细胞，体外培养扩增，20ng/ml rMICA诱导培养，收集培养细胞；步骤二：用细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒提取单个核细胞蛋白质；步骤三：串联高效液相层析（HPLC）纯化抗MICA抗体：它利用不同分离模式的结合，使混合物中的肽得到更大程度的分离，并且降低低丰度肽的丢失；步骤四：抗MICA抗体的鉴定：利用rMICA，用Western Blot进行反向验证。
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