[发明专利]一种获得RPGR 基因新的转录剪切形式的方法无效
| 申请号： | 201110225424.4 | 申请日： | 2011-08-08 |
| 公开（公告）号： | CN102925445A | 公开（公告）日： | 2013-02-13 |
| 发明（设计）人： | 顾烽;刘军;王平;顾大年;李则孝 | 申请（专利权）人： | 刘军;顾烽;王平 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/10;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 徐冬涛;戴朝荣 |
| 地址： | 214213 江苏省无锡市宜*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明属于基因工程领域，公开了一种获得RPGR基因新的转录剪切形式的方法。首先从组织中分离出核糖核酸；设计特定的寡脱氧核糖核酸引物片段，通过逆转录-聚合酶链式反应扩增出cDNA片段。经过克隆、筛选和顺序分析，证实了存在于RPGR基因转录过程中的一种新的剪切形式，即第五至第十一个外显子缺失，第四外显子与第十二外显子直接相连；基因仍保留原有的译读框架。这个剪切形式在国内、外都从未见诸报道。这一发现为了解RPGR基因的表达及功能提供了重要信息。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 获得 rpgr 基因 转录 剪切 形式 方法 | ||
【主权项】：
1.一种获得RPGR基因新的转录剪切形式的方法，其特征在于包含以下步骤：(1)从犬类组织中提取出核糖核酸；(2)设计特定的寡脱氧核糖核酸引物SEQ ID No.1和SEQ ID No.2；(3)用逆转录-聚合酶链式反应扩增出cDNA片段，；(4)应用![]()
克隆载体将扩增的cDNA片段克隆至大肠杆菌中，获得重组克隆菌落，(5)收集重组克隆菌落中的菌体，置于裂解液中，经过裂解反应后，进行琼脂糖凝胶电泳中；检验后筛选出所有带有cDNA片段的克隆菌落；(6)对筛选出的克隆中的cDNA片段进行顺序分析，通过与RPGR基因现有转录剪切形式比对，最终获得一种RPGR基因新的转录剪切形式：即第五至第十一个外显子缺失，第四外显子与第十二外显子直接相连；基因仍保留原有的译读框架。
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