[发明专利]一种低成本流水化生产组培苗的方法

摘要

本发明公开了一种低成本流水化生产组培苗的方法：包括培养基的配制、培养基的分装与灭菌、无菌操作进行外植体的分离与接种、组织培养等步骤，采用了聚丙烯薄膜袋代替传统玻璃容器，并改善了组织培养的照明光源。本发明中所使用的聚丙烯薄膜袋培养容器透光透气性好、成本低、重量轻、有效重量大、搬运更简单。通过本发明的改进，使得组培苗生产的成本降低，生产效率显著提高。

主权项

一种低成本流水化生产组培苗的方法，包括以下步骤：（一）培养基的配制：  （1） 称取以下重量分数的药品分别置于烧杯中：KH2PO4  3.75NH4NO3   36.43KNO3   41.94CaCl2·2H2O  9.71MgSO4·7H2O  8.17在各烧杯中分别加入药品总重量33‑34倍重的纯净水溶解后，按照所列各药品先后顺序将溶液缓慢混合入更大的烧杯中，同时不断搅拌，待用；（2）称取以下重量分数的药品，药品总质量为（1）中药品总质量的1/22：MnSO4·4H2O   10.8            ZnSO4·7H2O    4.17H3BO3                 3.00            KI            0.40Na2MoO4·2H2O  0.12           CoCl2·6H2O     0.012CuSO4·5H2O   0.012           FeSO4·7H2O    13.47Na2—EDTA     18.07          烟酸           0.24维生素B6     0.24           维生素B1       0.05甘氨酸        0.97           其余为肌醇将以上药品置于烧杯中，加药品总重量1000倍重的纯净水溶解，缓慢倒入（1）中配制好的溶液中，搅拌混匀后，待用；（3） 配制浓度为0.2mg/ml的6‑苄氨基腺嘌呤（6‑BA）和萘乙酸（NAA）溶液；（4）称取（2）中药品总重量30倍的琼脂、150倍的蔗糖倒入（1）步骤中的溶液中搅拌，加热沸腾后，根据不同植物的试管苗加入不同体积的（3）配制的6‑苄氨基腺嘌呤（6‑BA）和萘乙酸（NAA）溶液，最后按（1）中药品总重量计，每4.53g定容到1000mL，再逐滴滴入氢氧化钾溶液（1N）调节培养基的PH值到5.8；（二） 分装与灭菌：  将配制好的培养基趁热分装入聚丙烯薄膜袋中，用小夹子固定在一个用铁丝做成的简易框架上使其直立，然后放入高压灭菌锅消毒，灭菌时间在121℃保持18～20min即可；  （三）无菌操作：（1）无菌操作实验器具和材料的准备：包括超净工作台的无菌处理，消毒双手及切割刀和镊子等操作工具；（2）灭菌结束后，将简易架子放在超净工作台上，整理薄膜袋使其能够直立，用塑料袋封口机封住袋口，薄膜袋静置至培养基凝固，待用；（3）流水作业进行外植体的分离与接种：装有试管苗的培养袋、操作器具、培养皿及塑料袋封口机等用新洁尔灭或75%酒精擦拭消毒后放入超净工作台内；1号组培技术工人在超净工作台内将试管苗从培养袋中取出，置无菌滤纸上，用切割刀按照不同试管苗的繁殖要求对待繁殖的试管苗进行切割；同时2号技术工人剪开已灌装培养基且培养基已凝固的薄膜袋封口处，用消毒过并冷却的镊子将1号组培技术工人切割的繁殖的试管苗夹入薄膜袋内；3号组培技术工人将2号组培技术工人放入的块茎或茎段微插入培养基中，若是叶柄水平放置；4号组培技术工人将3号组培技术工人做好的薄膜袋，用塑料袋封口机将其薄膜袋封口并编号，放置于培养室中的培养架上；（四）按(三)所述步骤进行无菌操作，将薄膜袋封装的试管苗放置于培养室中的培养架上进行组织培养，组织培养的照明光源采用节能灯。