[发明专利]一种快速获得辣椒转基因植株的方法

摘要

一种快速获得辣椒转基因植株的方法，该方法包括取样；农杆菌活化和侵染；再生培养基和筛选培养基制备；未成熟胚接种和培养；不定芽形成和植株再。在短时间内即可高效地获得辣椒转基因再生植株。本发明从农杆菌侵染未成熟胚到再生植株的获得一般需要7周时间，培养过程中再生植株形成率最高可达50%，转基因植株阳性率高达80%。该发明中以未成熟胚为受体材料进行农杆菌侵染、接种培养后直接形成再生植株，缩短了培养周期、提高了培养效果和遗传转化效率，本发明若应用于基因功能验证和育种实践，必将大大加快辣椒基因功能组学的研究和育种实践进展。

主权项

一种快速获得辣椒转基因植株的方法，其特征在于包含下列步骤：1）取样：在果实采摘期晴天从健壮植株上取自然成熟的红果；2）农杆菌活化和侵染：将含有目的基因的农杆菌LBA4404接种于含有45mg/L卡那霉素及45mg/L利福平的YEB的固体培养基上，27℃暗培养2天后，挑单菌落接种至含有45mg/L卡那霉素及45mg/L利福平的YEB液体培养基中，27℃，250rpm振荡培养至OD600值为0.4~06，将菌液转入50mL离心管中，4000rpm离心菌液后，用等体积的无菌水悬浮菌液后备用；取1）中果实的种子，取出未成熟胚转移至已准备好的农杆菌菌液中，浸没5分钟；3）再生培养基和筛选培养基制备：再生和筛选培养基所用基本培养基为MS培养基，所用碳源为蔗糖，凝固剂为琼脂；再生培养基的组成成分为MS+1~5mg/L 6‑BA+3%wt蔗糖+0.8%wt琼脂，筛选培养基的组成成分为MS+1~5mg/L 6‑BA +3%wt蔗糖+0.8%wt琼脂+60mg/L卡那霉素；4）未成熟胚接种和培养：将2）中侵染的未成熟胚在灭菌滤纸上沥干菌液后，置于3）中再生培养基上，在27℃黑暗条件下培养后用无菌水冲洗外植体，转移到筛选培养基上黑暗培养，然后于光照度2000lx、光照时间12h、室温27℃下继续培养，每三角瓶放30个未成熟胚；5）不定芽形成和植株再生：接种后四周形成完整植株。