[发明专利]一种从长双歧杆菌NQ-1501中提取完整肽聚糖的方法

摘要

本发明涉及一种长双歧杆菌NQ-1501提取完整肽聚糖的方法，通过脱脂去除细胞膜上的脂肪类物质，抽提磷壁酸使细胞膜通透性增加，用酶解液去除细胞内的蛋白质类物质，最后通过离心清洗去除杂质后冻干即获得的完整肽聚糖。本发明的优点在于提取的完整肽聚糖细胞壁结构完整，具有良好的抗肿瘤作用；制备方法实用性强、操作简单、周期短、步骤简便合理，具有成本低、产率高、适宜规模化生产等优点。本发明还涉及由所述方法制备的完整肽聚糖及其进而制备的药物制剂。

主权项

一种从长双歧杆菌NQ‑1501中提取完整肽聚糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)菌体的洗涤：取长双歧杆菌NQ‑1501菌株湿菌体100克，加入生理盐水1000毫升混合均匀后，8000克力离心10分钟，弃去上清液，得到湿菌体；(2)脱脂步骤：将所述长双歧杆菌NQ‑1501湿菌体与氯仿2000毫升混合均匀，在30℃下搅拌24小时脱脂，8000克力离心10分钟，弃去上清液，得到沉淀；(3)磷壁酸的去除：取收集到的所述沉淀，与1％三氯乙酸1000毫升混合均匀后，于70℃水浴加热4小时，通过8000克力离心30分钟，弃去上清液，取得沉淀物；(4)酶解a、配制酶解液：pH7.2Tris‑盐酸缓冲液1000毫升中分别加入胰蛋白酶和中性蛋白酶，调节各个酶浓度至250NFU/mL；b、取所述沉淀物，加入酶解液中混合均匀，在30℃下搅拌12小时，通过8000克力离心30分钟，弃去上清，收集获得一次酶解沉淀；c、在所述一次酶解沉淀物中加入无菌水1000毫升摇匀，8000克力离心30分钟，弃去上清液，得到清洗后的沉淀物；(5)冻干保存步骤在所述清洗后的沉淀物中加入无菌水1000毫升摇匀，进行真空冷冻干燥至白色絮状粉末，即得长双歧杆菌NQ‑1501完整肽聚糖成品。