[发明专利]以嫩茎为外植体的滇杨组织培养方法

摘要

以嫩茎为外植体的滇杨组织培养方法，属于植物组织培养方法。本发明采集滇杨3年生枝条水培后以嫩茎为外植体，无菌嫩茎平放入分化培养基，在愈伤上长出丛生不定芽，再分别接入增殖、生根培养基，移栽炼苗基质等。本发明取材方便快捷，各阶段的培养基和炼苗基质都分别进行筛选比较，为滇杨工厂化快速繁殖、育苗以及滇杨生理遗传性质研究提供了方法。

主权项

以嫩茎为外植体的滇杨组织培养方法，包括以下步骤：（1）取生长健壮、无病虫害的3年生滇杨枝条，摘除枝条上叶片，置于室温下水培一个月，待其长出嫩茎后剪下作为外植体；（2）将步骤（1）嫩茎置入烧杯中，加入2%次氯酸钠，振荡6min，无菌水冲洗3遍，再加70%酒精消毒40s，之后加0.1%HgCl2消毒7 min，最后用无菌水冲洗5遍； （3）用MS+6BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L作为滇杨嫩茎不定芽诱导的分化培养基，将步骤（2）消毒后的无菌嫩茎平放入该培养基，20～25天生长出愈伤组织，约30天在愈伤上长出丛生不定芽； （4）用MS+6BA0.1mg/L+NAA0.02mg/L作为滇杨增殖培养基，将步骤（3）诱导后产生的不定芽接入该培养基，25天左右培养一代； （5）用1/2MS+NAA0.02mg/L作为滇杨生根培养基，将步骤（4）增殖培养后的壮苗插入该培养基，培养生根苗，15天左右生根；（6）将步骤（5）的生根瓶苗在组织培养室培养25天，转到普通实验室内闭瓶培养3天、开瓶培养2天进行炼苗前预处理，然后移栽到基质中炼苗；以上步骤（2）～（5）消毒接种工作均在超净工作台中操作，试管苗的培养均在组织培养室内进行，其培养条件为：温度25±2℃、光照1500‑2000Lx、光照时间12h/d、湿度70%～80%。